細胞培養對無菌環境的要求較為嚴格，稍有不慎細胞全軍覆沒，損失慘重。為此保持細胞室的無菌環境尤為重要。細胞培養間的殺菌主要涉及空氣的殺菌和操作臺，培養箱的滅菌，其常見的方法如下。
一、細胞房常規操作規范
1、 每天使用細胞房前需提前將層流室及緩沖間紫外燈打開照射30min。
2、 紫外滅菌消毒結束后通風15min，實驗人員方可進入細胞房工作。
3、 進入細胞房前先換鞋。
4、 進入緩沖間穿換上實驗服。
5、 進入層流室須戴上手套、口罩，消毒后才可以進行實驗。
6、 每間層流室內多可4個人使用，除實驗外，避免長時間逗留。
7、 實驗操作時盡量避免交談，走動。
8、 始終保持細胞房內外地面、桌面的清潔，物品擺放整齊。
9、 每天工作結束后，需關掉細胞房內不用的儀器、細胞房的燈、空調，離開時鎖好細胞房的門。
10、細胞房內的實驗服、鞋帽禁止穿出實驗室。
11、細胞房內垃圾及時清理，每周對細胞房進行消毒清潔。
二、培養箱使用
1、從培養箱取放物品前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。
2、培養瓶皿放入培養箱前，可以用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
3、按預定位置擺放培養器皿，方便查找，以免長時間敞開培養箱。
4、普通培養中的細胞，若非實驗需要，每瓶/板細胞每天只需要觀察生長狀態一次。
5、每次從培養箱拿取物品時，注意培養箱的CO2補給情況，及CO2鋼瓶中氣體使用情況。
三、超凈臺使用
1、超凈臺使用前用紫外燈照射15分鐘滅菌，使用前、后需用酒精棉球擦拭工作區消毒，所有物品放入超凈臺內使用前均應消毒。
2、如需點燃酒精燈，需檢查瓶中酒精是否足夠，液面應占瓶高1/3-2/3。
3、超凈臺中應擺放廢液杯和廢品杯各一只，用于暫時存放廢棄物，實驗結束后將杯內垃圾倒入水池或垃圾桶中，并沖洗晾干備用。
四、顯微鏡使用
1、顯微鏡使用前，用酒精棉從中間至周圍擦拭載物臺。
2、離開細胞房時或較長時間不需使用時，及時關上電源，延長燈泡壽命。盡量避免頻繁開關顯微鏡電源。
五、如有污染細胞間滅菌方法
在日常細胞培養工作中可采用以下幾點來控制支原體的污染問題:
1 、從可靠來源引進、使用細胞, 特別是的信譽良好的專門機構, 如ATCC 、基礎醫學細胞中心等, 這些機構對細胞質量進行一系列檢測。
2 、預防為主:細胞培養實驗室應制定嚴格的管理制度,按照規范的實驗程序操作。特別提醒一般實驗室可從戴口罩、帽子做起。
3 、定期對實驗室中的培養物進行支原體檢測。這也是國外一些重要實驗室的經驗。一旦發現已經污染支原體的培養物, 滅活后棄之。更換新的培養物。避免支原體的進一步播散。
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