飼料中硝基呋喃類藥物檢測的固相萃取方法
（Copure ® MCX）
一、實驗?zāi)康?br /> 本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測飼料中硝基呋喃類藥物的含量。 該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗?zāi)繕宋?br />呋喃唑酮 (CAS:67-45-8)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于飼料中硝基呋喃類藥物的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
農(nóng)業(yè)部1486號公告-8-2010 《飼料中硝基呋喃類藥物的測定 高效液相色譜法》
五、實驗材料
biocomma ® Copure ® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COMCX360)。
六、實驗步驟
1、樣品提取
準確移取飼料1.0 g于50 mL離心管中加入25 mL乙腈，渦旋1 min分散均勻，65℃超生提取15 min，每隔5 min手搖一次。3800 r / min離心15 min。取上清液5 mL于100 mL雞心瓶中，50℃ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。往雞心瓶中 加2%甲酸水溶液5 mL，超聲2min，渦動1min充分溶解，備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：MCX固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL 2%甲酸水溶液活化。 (2)上樣和洗脫: 往固相萃取柱中加入2%甲酸水溶液提取備用液，棄去流出液；加入3mL水淋洗，棄去淋洗液； 3mL固相萃取柱洗脫液（1%氨水水溶液：甲醇=3：7）洗脫收集洗脫液(整個上樣淋洗洗脫過程中流速保持 <1mL/min)。
(3)重新溶解: 50 ℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，0.22μm濾膜過濾，濾液上機測試。
3、HPLC條件
設(shè) 備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
梯度洗脫 ： A：乙腈 B：0.05% 乙酸銨溶液
表1: 梯度洗脫條件
流速：1.0 mL/min
檢測波長：365 nm
進樣體積:20 μL
七、實驗結(jié)果
1、2 mg/kg飼料中呋喃唑酮的添加回收結(jié)果
表1 2 mg/kg飼料中呋喃唑酮的添加回收結(jié)果
2、添加水平為2 mg/kg飼料中呋喃唑酮檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為2 mg/kg飼料中呋喃唑酮檢測的液相色譜圖
（Copure ® MCX）
一、實驗?zāi)康?br /> 本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測飼料中硝基呋喃類藥物的含量。 該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗?zāi)繕宋?br />呋喃唑酮 (CAS:67-45-8)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于飼料中硝基呋喃類藥物的檢測的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
農(nóng)業(yè)部1486號公告-8-2010 《飼料中硝基呋喃類藥物的測定 高效液相色譜法》
五、實驗材料
biocomma ® Copure ® MCX固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COMCX360)。
六、實驗步驟
1、樣品提取
準確移取飼料1.0 g于50 mL離心管中加入25 mL乙腈，渦旋1 min分散均勻，65℃超生提取15 min，每隔5 min手搖一次。3800 r / min離心15 min。取上清液5 mL于100 mL雞心瓶中，50℃ 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。往雞心瓶中 加2%甲酸水溶液5 mL，超聲2min，渦動1min充分溶解，備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：MCX固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL 2%甲酸水溶液活化。 (2)上樣和洗脫: 往固相萃取柱中加入2%甲酸水溶液提取備用液，棄去流出液；加入3mL水淋洗，棄去淋洗液； 3mL固相萃取柱洗脫液（1%氨水水溶液：甲醇=3：7）洗脫收集洗脫液(整個上樣淋洗洗脫過程中流速保持 <1mL/min)。
(3)重新溶解: 50 ℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，0.22μm濾膜過濾，濾液上機測試。
3、HPLC條件
設(shè) 備：Waters Alliance 2695
色譜柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
檢測器 ：Waters 2487 紫外檢測器
梯度洗脫 ： A：乙腈 B：0.05% 乙酸銨溶液
表1: 梯度洗脫條件
流速：1.0 mL/min
檢測波長：365 nm
進樣體積:20 μL
七、實驗結(jié)果
1、2 mg/kg飼料中呋喃唑酮的添加回收結(jié)果
表1 2 mg/kg飼料中呋喃唑酮的添加回收結(jié)果
2、添加水平為2 mg/kg飼料中呋喃唑酮檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為2 mg/kg飼料中呋喃唑酮檢測的液相色譜圖
