膠原蛋白是動物體內重要的蛋白質，約占總蛋白含量的25%。膠原蛋白肽，是膠原蛋白適度降解后形成的一種多肽，具有抗氧化、抗衰老、降血壓、促進皮膚膠原代謝、免疫調節等多種生理功能。
羅非魚是我國重要的養殖魚類，其魚皮中氨基酸組成合理且膠原蛋白含量較高，使羅非魚皮成為膠原蛋白肽的優質來源。
目前，制備膠原蛋白肽最常用的是酶解法和微生物發酵法，本文總結了這兩種膠原蛋白肽的制備方法。
01
酶解法
工藝流程：
①羅非魚皮的粉碎 → ②堿溶酸沉提蛋白 → ③膠原蛋白粗提物的精制 → ④
膠原蛋白肽的制備
操作要點：
①羅非魚皮的粉碎：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經打粉機粉碎。
②堿溶：在羅非魚皮中加入0.5%的氫氧化鈉溶液浸泡2h，清洗2次，再加入蒸餾水，在研磨機中勻漿至糊狀，制得總蛋白粗提物。
③酸沉：將總蛋白粗提物調整pH值為2，加熱至75℃，保溫提膠3h，制得膠原蛋白粗提物。
④膠原蛋白粗提物的精制：將澄清劑加入膠原蛋白粗提物中，調整pH值為2，攪拌均勻后靜置2h，制得膠原蛋白精制物。
其中，澄清劑為秋葵膠，仙草膠，瓜爾豆膠以質量比1:2:4混合并靜置4-6h，澄清劑的加入量為膠原蛋白粗提物質量的0.1-2%，澄清劑的pH值為2-4。
⑤膠原蛋白肽的制備：將膠原蛋白精制物調節pH值為7，加入復合蛋白酶酶解，在溫度為45℃的條件下，酶解2h，得到酶解液。
其中，復合蛋白酶為堿性蛋白酶和風味酶，質量比為5:2,組合酶的加入量為膠原蛋白精制物質量的0.4%-1%，酶解pH值為7.5-8.0。
02
發酵法
以羅非魚魚皮為原料，利用枯草芽孢桿菌固態發酵制備膠原蛋白肽。
工藝流程：
①羅非魚皮粉 → ②固態發酵培養基的制備 → ③種子液的制備 → ④接種、發酵 → ⑤加水過濾（紗布） → ⑥粗酶液的制備 → ⑦過濾、凍干 → ⑧膠原蛋白粗肽
工藝要點：
①魚皮的預處理：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經打粉機粉碎，冷凍至-20℃，密封備用。
②固態發酵培養基的制備：將處理好的魚皮進行滅菌（121℃高溫滅菌20 min），再在無菌條件下加入一定量的滅菌蒸餾水，調節培養基初始pH，作為固態發酵培養基。
③種子液的制備：將B.subtilis CCTCC AB 90008從甘油保藏管接種至營養瓊脂培養基中，37 ℃恒溫培養24 h，將活化好的菌種接至種子培養基（牛肉膏3 g/L，蛋白陳10 g/L，NaCl5 g/L，pH 7.2～7.4）中，于37 ℃、120r/min搖床培養一定時間，制得種子液。
④接種、發酵：按菌種接種量50 g/L接入培養好的發酵種子液，恒溫靜置培養，并每隔5h攪拌1次。發酵條件為：培養基初始pH值為7，種子液菌齡為14 h，發酵溫度為35 ℃，發酵時間為24 h。
⑤粗酶液的制備：發酵結束后，向魚皮培養基中加入0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.2），于5 000 r/min離心15 min，取上清液作為膠原酶粗酶液。
⑥過濾、凍干：用0.45 μm的濾膜過濾發酵液，初步去除發酵液中的雜質，收集濾液進行凍干，得固態發酵羅非魚皮膠原蛋白粗肽。
日期：2025-06-25
羅非魚是我國重要的養殖魚類，其魚皮中氨基酸組成合理且膠原蛋白含量較高，使羅非魚皮成為膠原蛋白肽的優質來源。
目前，制備膠原蛋白肽最常用的是酶解法和微生物發酵法，本文總結了這兩種膠原蛋白肽的制備方法。
01
酶解法
工藝流程：
①羅非魚皮的粉碎 → ②堿溶酸沉提蛋白 → ③膠原蛋白粗提物的精制 → ④
膠原蛋白肽的制備
操作要點：
①羅非魚皮的粉碎：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經打粉機粉碎。
②堿溶：在羅非魚皮中加入0.5%的氫氧化鈉溶液浸泡2h，清洗2次，再加入蒸餾水，在研磨機中勻漿至糊狀，制得總蛋白粗提物。
③酸沉：將總蛋白粗提物調整pH值為2，加熱至75℃，保溫提膠3h，制得膠原蛋白粗提物。
④膠原蛋白粗提物的精制：將澄清劑加入膠原蛋白粗提物中，調整pH值為2，攪拌均勻后靜置2h，制得膠原蛋白精制物。
其中，澄清劑為秋葵膠，仙草膠，瓜爾豆膠以質量比1:2:4混合并靜置4-6h，澄清劑的加入量為膠原蛋白粗提物質量的0.1-2%，澄清劑的pH值為2-4。
⑤膠原蛋白肽的制備：將膠原蛋白精制物調節pH值為7，加入復合蛋白酶酶解，在溫度為45℃的條件下，酶解2h，得到酶解液。
其中，復合蛋白酶為堿性蛋白酶和風味酶，質量比為5:2,組合酶的加入量為膠原蛋白精制物質量的0.4%-1%，酶解pH值為7.5-8.0。
02
發酵法
以羅非魚魚皮為原料，利用枯草芽孢桿菌固態發酵制備膠原蛋白肽。
工藝流程：
①羅非魚皮粉 → ②固態發酵培養基的制備 → ③種子液的制備 → ④接種、發酵 → ⑤加水過濾（紗布） → ⑥粗酶液的制備 → ⑦過濾、凍干 → ⑧膠原蛋白粗肽
工藝要點：
①魚皮的預處理：將魚皮去鱗除雜，洗凈后充分瀝干，切分成約1 cm×1 cm×1cm的碎塊并經打粉機粉碎，冷凍至-20℃，密封備用。
②固態發酵培養基的制備：將處理好的魚皮進行滅菌（121℃高溫滅菌20 min），再在無菌條件下加入一定量的滅菌蒸餾水，調節培養基初始pH，作為固態發酵培養基。
③種子液的制備：將B.subtilis CCTCC AB 90008從甘油保藏管接種至營養瓊脂培養基中，37 ℃恒溫培養24 h，將活化好的菌種接至種子培養基（牛肉膏3 g/L，蛋白陳10 g/L，NaCl5 g/L，pH 7.2～7.4）中，于37 ℃、120r/min搖床培養一定時間，制得種子液。
④接種、發酵：按菌種接種量50 g/L接入培養好的發酵種子液，恒溫靜置培養，并每隔5h攪拌1次。發酵條件為：培養基初始pH值為7，種子液菌齡為14 h，發酵溫度為35 ℃，發酵時間為24 h。
⑤粗酶液的制備：發酵結束后，向魚皮培養基中加入0.1mol/L檸檬酸鈉緩沖液（pH 6.2），于5 000 r/min離心15 min，取上清液作為膠原酶粗酶液。
⑥過濾、凍干：用0.45 μm的濾膜過濾發酵液，初步去除發酵液中的雜質，收集濾液進行凍干，得固態發酵羅非魚皮膠原蛋白粗肽。
日期：2025-06-25
