大腸桿菌測試片

大腸桿菌（熒光法）測試片說明書

一、原理

本測試片含有干粉培養基、選擇性抑制劑、熒光底物和冷水可溶性凝膠。培養基提供大腸桿菌生長所需營養；選擇性抑制劑可有效抑制其它細菌的生長；當有大腸桿菌生長繁殖，熒光底物被分解，游離出熒光基團，365nm紫外燈下菌落呈藍白色熒光。

二、包裝規格

25片/包；20包/箱。

三、樣品檢驗

1.樣品制備

按常規方法制備樣品稀釋液（推薦稀釋液為無菌生理鹽水，不可使用磷酸鹽緩沖液、含亞硫酸鈉稀釋液和其它含糖稀釋液），根據樣品中大腸桿菌數量推測選擇2-3個連續稀釋度備用。

2.接種

將測試片置于水平臺面，揭開上層薄膜，吸1mL樣品稀釋液滴加于培養層，緩慢蓋上上層薄膜，將勻液板有凹槽部分對準樣品稀釋液區域輕放于上層薄膜上，手指用力按壓勻液板使稀釋液于壓環內均勻擴散。每個稀釋度2個重復。

3.培養

接種后的測試片疊放（不多于15片）于自封口袋中（不封口），36℃±1℃培養。根據樣品中大腸桿菌活性，8h-12h可對樣品中大腸桿菌進行預判，16h-24h可進行準確計數。測試片放于平整處培養（可在培養箱中放一小塊紙板），不可直接放于鐵絲架上培養，容易使凝膠擠壓變形。

4.計數

培養結束后取出測試片，暗室中365nm紫外燈下觀察，有藍白色熒光的為大腸桿菌（菌落為藍白色圓點，周圍有淺藍白色熒光，可與其他熒光干擾物區分開），選擇大腸桿菌數為10cfu/片-100cfu/片的測試片進行計數。廢棄物需經121℃高壓滅菌20分鐘后處理。

四、測試片在大腸桿菌鑒定中的應用

本測試片可對常規檢測中產氣的LST、BGLB、EMB及其它大腸桿菌檢測的中間環節進行挑菌鑒定。

1.水化測試片

將測試片置于水平臺面，揭開上層薄膜，吸1mL稀釋液滴加于培養層，緩慢蓋上上層薄膜，將勻液板有凹槽部分對準稀釋液區域輕放于上層薄膜上，手指用力按壓勻液板使稀釋液于壓環內均勻擴散，凝固20分鐘備用。

2.接種

將水化后測試片置于水平臺面，揭開上層薄膜，接種針挑取待檢菌點種于測試片上，蓋上上層薄膜。

3.培養

接種后的測試片疊放（不多于15片）于自封口袋中（不封口），36℃±1℃培養8h。測試片放于平整處培養（可在培養箱中放一小塊紙板），不可直接放于鐵絲架上培養，容易使凝膠擠壓變形。

4.結果判讀

培養結束后取出測試片，暗室中365nm紫外燈下觀察，有藍白色熒光的為大腸桿菌陽性（菌落為藍白色圓點，周圍有淺藍白色熒光，可與其他熒光干擾物區分開）。廢棄物需經121℃高壓滅菌20分鐘后處理。

五、儲存：

陰涼避光處保存，保質期1年；開封后放于自封口袋中于室溫保存，并于1個月內用完。

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