瓊脂糖凝膠及反應液DNA回收試劑盒

MOBIO的 UltraClean® 15 DNA Purification Kit為10-15分鐘快速DNA回收試劑盒?？蓮腡AE和TBE瓊脂凝膠、溶液及酶反應液中回收DNA。回收片段大小范圍為60bp-50kb的DNA。

UltraClean®15 DNA Purification Kit選用了經濟的硅膠吸附法從瓊脂凝膠中回收DNA。電泳后，從凝膠中切取目標DNA條帶，在高離液序列鹽溶液環境下溶解。DNA在ULTRA SALT存在的情況下選擇性地吸附到ULTRA BIND溶液的硅膠中。沉淀經過沖洗用純水后重懸得到終DNA。此時DNA可直接用于下游實驗。

保持一致的回收率

l 只用槍頭輕輕上下吹打來重懸吸附了DNA的硅膠沉淀，而不用渦旋振蕩。

l DNA綁定和洗脫步驟要充分混勻。DNA綁定步驟期間若ULTRA BIND硅膠一致處于懸浮狀態會大大提高綁定效率，不要讓硅膠沉淀下來。

跑電泳條件建議

我們推薦TAE凝膠電泳pH7.5-7.8，TBE凝膠則pH8.0-8.3。4%的瓊脂糖凝膠都能適用于本試劑盒。也可以使用任何品牌和瓊脂糖類型。無需特別使用低熔點瓊脂也能獲得很好的回收率。

若ULTRA BIND干掉了

每次用完以后沒蓋好蓋子常會導致ULTRA BIND干掉了。干掉的ULTRA BIND可重新水合不影響綁定效果。根據30s離心后固體物質的體積，加入去離子水至終形成50%液體，50%固體的狀態。小心清理瓶蓋和密封環。充分渦旋混勻即可繼續使用。

若ULTRA SALT發黃

鹽溶液開始氧化了。溶液的原始pH值未改變前度是不會影響使用效果的。測pH值：確保玻璃電極不會受到高濃度鹽的影響，否則就改用pH試紙。的pH值范圍是6.9-7.4。超過此范圍，用10%冰醋酸調整。此動作會稍微影響鹽溶液的穩定性，但能保證DNA獲得很好的回收得率。旋緊瓶蓋或4℃保存都能避免氧化發黃或延緩氧化過程。

低回收得率

通常低回收得率是有綁定不好造成的。pH是影響硅膠吸附DNA效率的關鍵因素。的DNA綁定條件是pH6.9-7.4。ULTRA SALT的pH緩沖能力不能滿足凝膠的緩沖液，你可以用10%冰醋酸把凝膠調整到pH7.0-7.2。需要升pH則用0.1N NaOH。然后根據步驟6的指示添加ULTRA BIND。如果你的pH檢測儀對高鹽敏感，請改用pH檢測試紙。

增加回收得率

l 綁定步驟充分混勻

l 只用槍頭上下輕輕吹打重懸ULTRA BIND硅膠，不要渦旋

l 綁定過程中監測pH。取少量DNA/ULTRA SALT點上pH試紙即可。合適的pH值應為6.9-7.4.。ULTRA MELT也可以每次少量添加并混勻來降低pH值。當pH趨于合適，DNA的吸附綁定才能正常進行。

l 盡可能不要低于55℃溶膠。

文獻

·         Kazuya Ishikawa, Kensaku Maejima, Ken Komatsu, Yugo Kitazawa, Masayoshi Hashimoto, Daisuke Takata, Yasuyuki Yamaji, and Shigetou Namba. Identification and characterization of two novel genomic RNA segments of fig mosaic virus, RNA5 and RNA6. J. Gen. Virol., Jul 2012; 93: 1612 - 1619.

·         Saar, I., Poldmaa, K., and Koljalg, U. The Phylogeny and Taxonomy of Genera Cystoderma and Cystodermella (Agaricales) based on Nuclear ITS and LSU Sequences . Mycological Pregress. 8(1): 59-73 (2009).

·         Vukovi, J., Ruitenberg, M.J., Roet, K., Fransse, E., Arulpragasam, A., Sasaki, T., Verhaagen, J., Harvey A.R., Busfield, S.J., and Plant, G.W. The Glycoprotein Fibulin-3 Regulates Morphology and Motility of Olfactory Ensheathing Cells In Vitro. Glia. 57(4): 424-443 (2009).

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