96孔板強力土壤D高通量提取試劑盒NA

簡介

PowerSoil®-htp 96 Well Soil Isolation Kit可用于最多0.25 g土壤中基因組DNA的提取。該試劑盒給研究者們帶來了新的提取環境樣品中基因組DNA的高通量方法。與UltraClean®-htp 96 Well Soil Isolation Kit不同的是，PowerSoil®-htp 96 Well Soil Isolation Kit含有抑制因子去除技術（Inhibitor Remover Technology®, IRT），能更高效地去除抑制PCR的腐殖質，即使是極為復雜的土壤樣品，也能高效去除PCR抑制因子，從而使獲得的DNA能成功進行PCR擴增等下游應用。

已提取的樣品包括堆肥、底泥和糞便等多種類型。提取出來的DNA可直接用作模板進行PCR擴增，以分析樣品中的微生物多樣性，經過PCR擴增驗證可以提取的微生物類型有：細菌（革蘭氏陽性、革蘭氏陰性和芽孢菌類）、放線菌和真菌等。

操作預覽

將環境樣品加入到96孔bead beating plate中快速徹底均質。結合機械和化學方法使細胞裂解。通過專門的沉淀過程去除腐植酸。釋放的基因組總DNA吸附到96孔spin column plate硅膠膜上，然后將DNA從膜上洗脫下來。獲得的DNA可直接用于PCR分析或其他下游應用。

注意：2塊96孔板的操作時間估計將近8 h，操作說明中會提到暫停點。操作中大部分時間會用于稱取和添加土壤樣品。

加樣量

該試劑盒的設計加樣量是0.25g土壤樣品。不同類型土樣建議加樣量見下表，濕土見“濕土”部分：

*要一次提取5 g以上土壤DNA，推薦使用PowerMax® Soil DNA Isolation Kit（貨號：12988-10）

濕土

若土樣含水量較高，10000g離心30s，去除游離水分再稱重加樣。嚴格控制0.25g的起始加樣量。

難裂解細胞

若樣品中的微生物不易被機械和化學方法裂解，可在加入C1溶液后，加一個70℃水浴10 min的步驟，再使用96孔板振蕩器進行機械裂解。

樣品預處理方法準備（傳統冷凍法）

將樣品加入到Bead Plate后置于-70℃或-20℃中直至樣品完全冷凍。迅速將Bead Plate放到65℃水浴中。再重復上述過程一次后加入C1溶液。

可選：第二次反復凍融后，對于某些微生物，可計入蛋白酶K與C1Solution一同作用，以提高裂解效率。

離心速度達不到4500 g

用說明書中時間和轉速的乘積來確定總離心力。根據離心機的速度來計算離心時間（可四舍五入）以保證足夠離心力。例如：4500 g ×10 min = 45000。若離心機速度為2500 g, 則離心45000÷2500 = 15 min。

DNA濃縮

最終DNA體積為100μl。要濃縮DNA，可加入5μl 5M NaCl并上下顛倒3-5次混勻。然后加入200μl 冷乙醇并上下顛倒3-5次混勻。在-20℃孵育10min或過夜孵育。13000g離心15 min。棄去所有上清液。用70%冷乙醇洗滌DNA沉淀。13000 g離心10 min 再次沉淀樣品。棄去乙醇并用真空離心蒸發器、干燥器或冷干機去除殘余乙醇。用無菌水或10mM Tris重懸沉淀。

注意：樣品單獨轉移至離心管后才能進行此濃縮。

DNA保存

洗脫到C6溶液（10mM Tris）的DNA應保存在-20℃以防降解。用TE緩沖液洗脫DNA可防止DNA降解，但其中的EDTA可能會抑制下游PCR或測序等。DNA也可用無菌DNA-Free PCR級水（貨號：17000-10）洗脫。用無菌水洗脫的DNA應保存在-70℃。

KingFisher Duo、KingFisher Flex和epMotion自動化核酸提取儀定制96孔板磁珠法高通量提取：

PowerMag™ Soil DNA Isolation Kit (Optimized for KingFisher®)

PowerMag™ Soil DNA Isolation Kit (Optimized for epMotion®)

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