為慶祝第九屆微生物檢測與控制技術交流會召開，特此為大家講授乳糖發酵與ONPG試驗。
各位親，那乳糖發酵試驗與ONPG試驗，你有木有傻傻地分不清？還是聽額細細道來哈。
先說乳糖發酵試驗，這是用來檢測細菌分解乳糖能力的一種生化試驗。大家知道，乳糖是葡萄糖和半乳糖這兩個單糖，通過糖苷鍵連接而成一種雙糖。而乳糖的分解呢，是乳糖在β-半乳糖苷酶的作用下，糖苷鍵發生斷裂并產生葡萄糖和半乳糖。
這β-半乳糖苷酶是在細胞內的咧，其實細菌分解乳糖，一般還需要一種位于細胞膜上的β-半乳糖苷滲透酶來參與。這β-半乳糖苷滲透酶的作用嘛，是將細胞外的乳糖分子主動轉運到細胞內。所以說啊，乳糖發酵試驗可以檢測兩種酶：β-半乳糖苷酶和β-半乳糖苷滲透酶。
具有這兩種酶的細菌，可迅速將乳糖分子主動轉運到細跑內，在24小時內即可分解乳糖并產酸，導致乳糖發酵培養基的顏色發生變化，表現為乳糖發酵試驗陽性。而缺乏此兩種酶的細菌，因為不能分解乳糖產酸，乳糖發酵培養基不會變色，乳糖發酵試驗呈現為陰性。還有一些乳糖遲緩發酵的細菌，只具備β-半乳糖苷酶，但是由于缺乏β-半乳糖苷滲透酶，乳糖只能通過被動擴散緩慢地進入細胞內，培養3天以上，才能使乳糖發酵培養基變色，表現為乳糖遲緩發酵。
至于ONPG試驗咧，是用于快速檢測β-半乳糖苷酶的一種生化試驗。與乳糖不同，鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）可迅速進入細菌細胞內，ONPG被β-半乳糖苷酶水解后，釋放出黃色的鄰硝基酚（ONP），培養基因此變黃，ONPG試驗表現為陽性。細菌若沒有β-半乳糖苷酶，就不分解進入細胞的ONPG，不能釋放出黃色的ONP，ONPG試驗結果也就為陰性。
總而言之，不同的細菌具有不同的酶，乳糖發酵與ONPG試驗可有以下四種結果。
甲、乳糖發酵試驗陽性，ONPG試驗陽性： 對于大多數大腸埃希氏菌，由于同時具有β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶，其表現為發酵乳糖，ONPG試驗也為陽性。
乙、乳糖發酵試驗陰性，ONPG試驗陰性： 對于普通變形桿菌，β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶都木有，其表現為不發酵乳糖，ONPG試驗為陰性。
丙、乳糖發酵遲緩陽性，ONPG試驗陽性：對于亞利桑那菌，雖然具有β-半乳糖苷酶，但缺少β-半乳糖苷滲透酶，其表現為乳糖遲緩發酵，ONPG試驗還是陽性滴。
丁、乳糖發酵試驗陽性，ONPG試驗陰性：有些不動桿菌和假單胞菌，β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶也都是木有，雖然不能分解乳糖，但是卻可將乳糖轉化為乳糖酸，也能導致乳糖發酵培養基變色，表現為發酵乳糖的假象，由于缺乏β-半乳糖苷酶，其ONPG試驗卻是陰性滴。
親，這乳糖發酵試驗與ONPG試驗，你都能分清了吧 ？是不是美滴很，美滴很？不要著急，還有一個贈品呢：下面再說說ONPG試驗的注意事項。
1、良好的緩沖作用是ONPG試驗的關鍵，所以說接種前最好將那ONPG溶液，在36℃水浴一段時間，以溶解在儲存過程中產生的磷酸鹽結晶。
2、細菌的接種量要大些哈，這樣既可加快反應速度，也有利于結果觀察。
3、ONPG試劑一般情況下是無色的，但有時其中的蛋白胨可致試劑呈輕微黃色，此時應加做陰性對照予以區分。
4、需要提醒的是，ONPG試驗不能用于產黃色素細菌的檢測，如果懷疑培養基變黃是細菌產黃色素的緣故，要先離心再來進行結果判讀。
5、葡萄糖對β-半乳糖苷酶有抑制作用，在含乳糖的培養基上生長的細菌，其β-半乳糖苷酶活性也就更高?？傊?，用乳糖含量高的培養基，就對咧！
主要參考文獻：
1、J F MacFadden. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria[M]. Third Edition. Williams & Wilkins, Baltimore, 2000.
2、Lapage S P, Efstratiou A, Hill L R. The ortho-nitrophenol （ONPG） test and acid from lactose in Gram-negative genera[J]. Journal of Clinical Pathology, 1973, 26（11）：821-825.
日期：2019-07-21
各位親，那乳糖發酵試驗與ONPG試驗，你有木有傻傻地分不清？還是聽額細細道來哈。
先說乳糖發酵試驗，這是用來檢測細菌分解乳糖能力的一種生化試驗。大家知道，乳糖是葡萄糖和半乳糖這兩個單糖，通過糖苷鍵連接而成一種雙糖。而乳糖的分解呢，是乳糖在β-半乳糖苷酶的作用下，糖苷鍵發生斷裂并產生葡萄糖和半乳糖。
這β-半乳糖苷酶是在細胞內的咧，其實細菌分解乳糖，一般還需要一種位于細胞膜上的β-半乳糖苷滲透酶來參與。這β-半乳糖苷滲透酶的作用嘛，是將細胞外的乳糖分子主動轉運到細胞內。所以說啊，乳糖發酵試驗可以檢測兩種酶：β-半乳糖苷酶和β-半乳糖苷滲透酶。
具有這兩種酶的細菌，可迅速將乳糖分子主動轉運到細跑內，在24小時內即可分解乳糖并產酸，導致乳糖發酵培養基的顏色發生變化，表現為乳糖發酵試驗陽性。而缺乏此兩種酶的細菌，因為不能分解乳糖產酸，乳糖發酵培養基不會變色，乳糖發酵試驗呈現為陰性。還有一些乳糖遲緩發酵的細菌，只具備β-半乳糖苷酶，但是由于缺乏β-半乳糖苷滲透酶，乳糖只能通過被動擴散緩慢地進入細胞內，培養3天以上，才能使乳糖發酵培養基變色，表現為乳糖遲緩發酵。
至于ONPG試驗咧，是用于快速檢測β-半乳糖苷酶的一種生化試驗。與乳糖不同，鄰硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG）可迅速進入細菌細胞內，ONPG被β-半乳糖苷酶水解后，釋放出黃色的鄰硝基酚（ONP），培養基因此變黃，ONPG試驗表現為陽性。細菌若沒有β-半乳糖苷酶，就不分解進入細胞的ONPG，不能釋放出黃色的ONP，ONPG試驗結果也就為陰性。
總而言之，不同的細菌具有不同的酶，乳糖發酵與ONPG試驗可有以下四種結果。
甲、乳糖發酵試驗陽性，ONPG試驗陽性： 對于大多數大腸埃希氏菌，由于同時具有β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶，其表現為發酵乳糖，ONPG試驗也為陽性。
乙、乳糖發酵試驗陰性，ONPG試驗陰性： 對于普通變形桿菌，β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶都木有，其表現為不發酵乳糖，ONPG試驗為陰性。
丙、乳糖發酵遲緩陽性，ONPG試驗陽性：對于亞利桑那菌，雖然具有β-半乳糖苷酶，但缺少β-半乳糖苷滲透酶，其表現為乳糖遲緩發酵，ONPG試驗還是陽性滴。
丁、乳糖發酵試驗陽性，ONPG試驗陰性：有些不動桿菌和假單胞菌，β-半乳糖苷滲透酶和β-半乳糖苷酶也都是木有，雖然不能分解乳糖，但是卻可將乳糖轉化為乳糖酸，也能導致乳糖發酵培養基變色，表現為發酵乳糖的假象，由于缺乏β-半乳糖苷酶，其ONPG試驗卻是陰性滴。
親，這乳糖發酵試驗與ONPG試驗，你都能分清了吧 ？是不是美滴很，美滴很？不要著急，還有一個贈品呢：下面再說說ONPG試驗的注意事項。
1、良好的緩沖作用是ONPG試驗的關鍵，所以說接種前最好將那ONPG溶液，在36℃水浴一段時間，以溶解在儲存過程中產生的磷酸鹽結晶。
2、細菌的接種量要大些哈，這樣既可加快反應速度，也有利于結果觀察。
3、ONPG試劑一般情況下是無色的，但有時其中的蛋白胨可致試劑呈輕微黃色，此時應加做陰性對照予以區分。
4、需要提醒的是，ONPG試驗不能用于產黃色素細菌的檢測，如果懷疑培養基變黃是細菌產黃色素的緣故，要先離心再來進行結果判讀。
5、葡萄糖對β-半乳糖苷酶有抑制作用，在含乳糖的培養基上生長的細菌，其β-半乳糖苷酶活性也就更高?？傊?，用乳糖含量高的培養基，就對咧！
主要參考文獻：
1、J F MacFadden. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria[M]. Third Edition. Williams & Wilkins, Baltimore, 2000.
2、Lapage S P, Efstratiou A, Hill L R. The ortho-nitrophenol （ONPG） test and acid from lactose in Gram-negative genera[J]. Journal of Clinical Pathology, 1973, 26（11）：821-825.
日期：2019-07-21
