赭曲霉毒素A總量ELISA定量檢測試劑盒赭曲霉毒素是一類真菌(如黃曲霉,青霉和赭曲霉)的有毒的代謝產物,這些真菌可能產生的赭曲霉毒素A是一種腎毒素,具有致癌性。經常在人類食品和動物飼料中被檢測到,主要存在于谷物中,日常用品中也經常含有。赭曲霉毒素會導致人的巴爾干半島腎病變(BEN)腎系統的瘤病變。對于動物,它會造成豬的腎功能損傷,會造成雞和火雞生長緩慢,飼料轉化率低,腎病甚至死亡,減少蛋產量和蛋殼質量。
赭曲霉毒素A總量試劑盒是利用競爭酶聯免疫定量檢測谷物,咖啡或動物飼料中含有的其他物質中所含的赭曲霉毒素A總量。試驗方法的原理赭曲霉毒素A總量試劑盒的工作原理是酶聯免疫吸附分析法。一種赭曲霉毒素的特異性抗體包被在聚苯乙烯酶標板的小孔中,用70%的甲醇將樣品中的赭曲霉毒素萃取后,將含有赭曲霉毒素的萃取液或標準品和過氧化物酶標記赭曲霉毒素加入到小孔中,此時過氧化物酶標記赭曲霉毒素和樣品、標準品中游離的赭曲霉毒素競爭性地與包被在板上的抗體結合。在室溫下溫育清洗后,加入底物溶液,室溫孵育一段時間,發生藍色反應。加入停止液,終止顏色反應,藍色變成黃色。用酶標儀在450nm處測定光密度值(OD),樣品中赭曲霉毒素A總量的濃度與OD值成反比關系。 試劑盒中所包含的試劑:1.酶標板1塊:包括12條,每條含有8個小孔,每個孔中均包被有鼠抗赭曲霉毒素的單克隆抗體.2.稀釋板1塊:沒有包被的12條8孔板。3. 6瓶赭曲霉毒素A標準品濃度分別為:0, 0.2, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0 ng/ml(ppb),每瓶1.5 ml.4.酶標記物(過氧化物酶標記的赭曲霉毒素A):25 ml。5.底物溶液(TMB):15 ml。6.停止溶液(0.5 M H2SO4):15 ml。 需要的其它試劑和設備(試劑盒沒有提供):粉碎機:能將樣品磨至速溶咖啡顆粒大小。萃取容器:至少125ml。天平:20克以上的稱量范圍。100ml量筒。每個樣品70ml試劑級甲醇。30ml去離子水或蒸餾水。濾紙:Whatman 1 型或同類型濾紙。過濾漏斗。l。ml和200m移液器和吸頭:100計時器。洗瓶。吸水紙。酶標儀(450nm)。 注意事項:為了保證測定結果的可靠性,請按照下列良好實驗室操作規范(GLP)進行實驗1.在進行分析操作之前,請將所有的試劑回溫到室溫(19-27°C)。2.使用前,試劑儲存在2 - 8°C,不要冰凍。3.未用完的試劑不要倒回原瓶中,按照實驗所需的量取用試劑。4.實驗過程中注意保證溫度和反應時間。5.所有的試劑在使用前,通過翻轉搖動進行充分的混合,但不要引起泡沐的產生。6.一旦實驗開始,所有的操作步驟應該在規定的時間內完成,不要中斷或者超時。7.所有的試劑瓶操作完成后立即蓋好蓋,不要將不同試劑瓶的蓋混用。8.每個樣品只能用自己的吸頭,不能混用,防止交叉污染。9.所有的樣品和標準物必須同時使用,所有的試驗條件保持一致。10.不要將不同批次的試劑混用。11.不要使用過期的試劑。12.要經常的檢查酶標儀和微量移液器的精度和準確度。
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