食品中蘇丹紅染料檢測的固相萃取方法
（Copure ®蘇丹紅檢測柱）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節 省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
蘇丹紅I(CAS:842-07-9)，蘇丹紅II(CAS:3118-97-6)，蘇丹紅III(CAS:85-86-9)，蘇丹紅Ⅳ(CAS:85-83- 6)。
三、應用范圍
本方法適用于食品中蘇丹紅染料的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 19681-2005 食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法》。
五、實驗材料
biocomma ® Copure ® 蘇丹紅檢測柱500mg/3mL(Cat.No.COSD3500)。
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取均質甜橙試樣2.0 g試樣(精確至0.001 g)于50 mL離心管中，加入20 mL正己烷，超聲5 min，過濾，用10 mL 正己烷洗滌殘渣數次，至洗出液無色，合并正己烷液，用旋轉蒸發儀濃縮至5 mL以下。
2、SPE柱凈化
(1)活化：向蘇丹紅檢測柱中加入6.0 mL正己烷活化。
(2)上樣和洗脫：在柱中保持正己烷液面為2 mm左右時上樣，立即倒入上述待凈化溶液，用正己烷少量多次淋 洗濃縮瓶，一并注入層析柱，待樣液完全流出后，視樣品中含油雜質的多少用10-30 mL正己烷洗柱，直至流出 液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60 mL洗脫，并收集洗脫液。
(3)重新溶解：50 ℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用丙酮轉移并定容至5 mL，經0.45 µm有機濾膜過濾后上液 相色譜儀測定。
3、HPLC條件
色譜柱：XR-ODS Ⅱ C18（2.0mm ×75mm×2.2µm）
流動相：A[0.1%甲酸水溶液-乙腈=85:15]；B[0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20] 梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
流速：1 mL/min
柱溫：30 ℃
進樣體積：10 µL
波長：520 nm
七、實驗結果
1、10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料的添加回收結果
表2 10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料的添加回收結果
2、添加水平為10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料檢測色譜圖
圖1 添加水平為10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料檢測色譜圖
（Copure ®蘇丹紅檢測柱）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為檢測手段。該方法可簡化樣品的前處理過程，節 省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
蘇丹紅I(CAS:842-07-9)，蘇丹紅II(CAS:3118-97-6)，蘇丹紅III(CAS:85-86-9)，蘇丹紅Ⅳ(CAS:85-83- 6)。
三、應用范圍
本方法適用于食品中蘇丹紅染料的HPLC檢測及確證。
四、參考標準
《GB/T 19681-2005 食品中蘇丹紅染料的檢測方法高效液相色譜法》。
五、實驗材料
biocomma ® Copure ® 蘇丹紅檢測柱500mg/3mL(Cat.No.COSD3500)。
六、實驗方法
1、樣品提取
稱取均質甜橙試樣2.0 g試樣(精確至0.001 g)于50 mL離心管中，加入20 mL正己烷，超聲5 min，過濾，用10 mL 正己烷洗滌殘渣數次，至洗出液無色，合并正己烷液，用旋轉蒸發儀濃縮至5 mL以下。
2、SPE柱凈化
(1)活化：向蘇丹紅檢測柱中加入6.0 mL正己烷活化。
(2)上樣和洗脫：在柱中保持正己烷液面為2 mm左右時上樣，立即倒入上述待凈化溶液，用正己烷少量多次淋 洗濃縮瓶，一并注入層析柱，待樣液完全流出后，視樣品中含油雜質的多少用10-30 mL正己烷洗柱，直至流出 液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷液60 mL洗脫，并收集洗脫液。
(3)重新溶解：50 ℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用丙酮轉移并定容至5 mL，經0.45 µm有機濾膜過濾后上液 相色譜儀測定。
3、HPLC條件
色譜柱：XR-ODS Ⅱ C18（2.0mm ×75mm×2.2µm）
流動相：A[0.1%甲酸水溶液-乙腈=85:15]；B[0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80:20] 梯度洗脫
表1 梯度洗脫條件
流速：1 mL/min
柱溫：30 ℃
進樣體積：10 µL
波長：520 nm
七、實驗結果
1、10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料的添加回收結果
表2 10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料的添加回收結果
2、添加水平為10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料檢測色譜圖
圖1 添加水平為10mg/kg甜橙基質中蘇丹紅染料檢測色譜圖
