添加萘啶酮酸，吖啶黃素即為L(zhǎng)B1，LB2，用于李斯特氏菌二步增菌(GB4789.28-2013，GB 4789.30-2016)。
二、實(shí)驗(yàn)原理：
胰胨、多價(jià)胨和酵母膏提供氮源、維生素和生長(zhǎng)因子；李斯特氏菌可耐受較高含量的氯化鈉；磷酸二氫鉀和磷酸氫二鈉為緩沖劑；七葉苷為可發(fā)酵的糖類；萘啶酮酸和吖啶黃為選擇性抑菌劑，抑制非李斯特氏菌的生長(zhǎng)。
三、培養(yǎng)基配方（g/L）：
| 胰胨 | 5.0 |
| 多價(jià)胨 | 5.0 |
| 酵母膏 | 5.0 |
| 氯化鈉 | 20.0 |
| 磷酸氫二鉀 | 12.0 |
| 磷酸二氫鉀 | 1.4 |
| 七葉苷 | 1.0 |
| pH 7.3±0.1 25℃ | |
此配方可以進(jìn)行改良或增加營(yíng)養(yǎng)成分以獲得的結(jié)果
四、試驗(yàn)方法：
1、稱取本品49.4g， 加熱攪拌溶解于 1000ml蒸餾水中，分裝， 121℃高壓滅菌15分鐘，備用。
LB1液：每225ml培養(yǎng)基中加入1支萘啶酮酸（5.0mg/支）和1支吖啶黃素（3.0mg/支）；
LB2液：每200ml培養(yǎng)基中加入1支萘啶酮酸（4.0mg/支）和1支吖啶黃素（5.0mg/支）。
2、制備質(zhì)控菌液。
3、混合菌的接種
在裝有待測(cè)培養(yǎng)基的試管中接種10-100CFU的目標(biāo)菌，并接種1000-5000CFU的非目標(biāo)菌，接種總量1ml，同時(shí)接種兩個(gè)平行管，混勻。同時(shí)分別將目標(biāo)菌菌懸液（與試管接種同一稀釋度）和非目標(biāo)菌菌懸液（比試管接種小10-100倍稀釋度）1ml傾注平板，接種兩個(gè)平板，作接種量計(jì)數(shù)用，30±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。
4、非目標(biāo)菌接種
在裝有待測(cè)培養(yǎng)基的試管中接種1000-5000CFU的非目標(biāo)菌，接種量1ml，同時(shí)接種兩個(gè)平行管，混勻，30±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。
5、培養(yǎng)液的接種
5.1混合菌培養(yǎng)液的接種
用10μL接種環(huán)取1環(huán)經(jīng)培養(yǎng)后的混合菌培養(yǎng)液，換線接種到PALCAM上，每管接種一個(gè)平板，36±1℃培養(yǎng)24-48小時(shí)。
5.2非目標(biāo)菌培養(yǎng)液的接種
吸取10μL經(jīng)培養(yǎng)后的非目標(biāo)菌培養(yǎng)液，均勻涂布接種到TSA上，每管接種一個(gè)平板。也可使用傾注法進(jìn)行接種，36±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)。
6、記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果
目標(biāo)菌在選擇性平板上的菌落應(yīng)>10CFU，則表示待測(cè)液提培養(yǎng)基的生長(zhǎng)率良好；非目標(biāo)菌在非選擇性平板上的菌落<100CFU，則表示待測(cè)液體培養(yǎng)基的選擇性為良好。
五、結(jié)果觀察與解釋：
接種以下質(zhì)控菌株，在30±1℃培養(yǎng)18-24小時(shí)：
| 質(zhì)控菌株 | 菌株編號(hào) | 接種量 （CFU） | 方法 | 質(zhì)控結(jié)果 | 其他特征 |
| 單增李斯特氏菌 大腸埃希氏菌 糞腸球菌 | ATCC19115 ATCC25922 ATCC29212 | 10-100 1000-5000 1000-5000 | 半定量 | 在PALCAM上＞10CFU | 灰色至黑色菌落，帶有黑色暈環(huán) |
| 大腸埃希氏菌 | ATCC25922 | 1000-5000 | 在TSA上＜100CFU | / | |
| 糞腸球菌 | ATCC29212 | 1000-5000 | 在TSA上＜100CFU | / |
圖1-2 李氏菌增菌肉湯（LB2）微生物質(zhì)控結(jié)果
備注：a：?jiǎn)卧隼钏固厥暇琤：大腸埃希氏菌，c：糞腸球菌，d：空白對(duì)照
六、注意事項(xiàng)：
本培養(yǎng)基僅為細(xì)菌鑒定的一部分，需做其他補(bǔ)充試驗(yàn)。
注:本文屬海博生物原創(chuàng),未經(jīng)允許不得轉(zhuǎn)載。
