血清中β-受體激動劑檢測的固相萃取方法
（Copure® HLB）
一、實驗目的
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測血清中β受體激動劑含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節省有機溶劑的使用，操作簡便。
二、實驗目標物
沙丁胺醇(CAS:18559-94-9)、班布特羅(CAS:81732-65-2)、克倫特羅(CAS:129138-58-5)、萊克多巴胺(CAS:97825-25-7)。
三、應用范圍
本方法適用于血清中β-受體激動劑的檢測的HPLC檢測及確證。
四、實驗材料
biocomma® Copure® HLB固相萃取柱60 mg/3 mL (Cat. No. COHLB360)。
五、實驗步驟
1、樣品提取
準確移取樣品1.0mL血清樣品，備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：HLB固相萃取柱使用前用1mL甲醇、1mL水活化。
(2)上樣和洗脫：在HLB固相萃取柱上加入1mL血清樣品，棄去流出液；用1 mL 5%甲醇水溶液（v/v）、淋洗，棄去淋洗液；抽干小柱；用2mL甲醇溶液洗脫，收集洗脫液（整個上樣、洗脫過程保持流速1mL/min）。
(3)重新溶解：50℃緩慢氮氣流條件下吹至近干，用1 mL 甲醇溶解。經0.22μm濾膜重新過濾，供高效液相色
譜測定。
3、HPLC條件
設備：Waters Alliance 2695
色譜柱：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250mm)
檢測器：Waters 2475 熒光檢測器
檢測波長：激發波長：206 nm
發射波長: 226 nm
流動相：A:乙腈B: 0.1%甲酸水
表1:梯度洗脫條件
流速：1.0 mL/min
進樣體積:20μL
六、實驗結果
1、1mg/kg血清中β-受體激動劑的添加回收結果
表1 1 mg/kg血清中β-受體激動劑的添加回收結果
2、添加水平為1mg/kg血清中β-受體激動劑檢測的液相色譜圖
圖1添加水平為1mg/kg血清中β-受體激動劑檢測的液相色譜圖
