RIPA裂解液 RIPA組織/細胞裂解液 金克隆供應

貨號：EX6020                             

規格：100mL

本產品配有一支PMSF（100mM，1.5mL）

保存：RIPA裂解液4℃保存，PMSF -20℃保存。

產品簡介：

RIPA組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

使用說明：

如發現RIPA有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。

根據使用量，取每1mL RIPA加入10uL PMSF，使PMSF的終濃度為1mM，混勻備用（PMSF現用現加）。

1、樣品前處理：

a)對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照6孔板每孔細胞量加入150-250 uL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。

b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照6孔板每孔細胞量加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成5-10×10⁵細胞/管，然后再裂解。

c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每20mg組織加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。

2、后處理：

將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的蛋白濃度測定、SDS-PAGE、Western blotting和免疫沉淀等操作。

注意事項：

1、 使用本裂解液可以裂解細胞核，釋放出核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量SDS（1%），煮沸后離心測濃度。

2、 本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用Bradford蛋白濃度測定試劑盒，請選擇BCA法或者Lowry法檢測蛋白濃度。

3、 如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。

責權聲明：