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中文名稱:猴子膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒
英文名稱:Mo
nkey Collagenase I ELISA KIT
規(guī)格:96T
品牌:R&D
“猴子膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒”標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
ELISA實(shí)驗(yàn)中最可能出現(xiàn)問題
一、 所有孔未顯色 1、分析原因: 1) 微孔加入抗體后,洗板不徹底,微孔中存在游離的抗體。 2) 用錯(cuò)試劑。 3) 在操作中忘記加酶或抗體。 2、解決辦法: 1) 檢查洗板器械,比如洗板機(jī)管道是否堵塞、洗液是否用完。 2) 在加樣前,要看清瓶簽。 3) 嚴(yán)格按說明書操作步驟進(jìn)行實(shí)驗(yàn),確保每步都到位。 二、 所有孔顯色偏低 1、分析原因: 1) 微孔加入抗體后,洗板不徹底,微孔中存在游離的抗體。 2) 洗板不干凈。 3) 抗體污染了酶結(jié)合物等其它試劑。 4) 溫度沒達(dá)到要求。 5) 每孔加入的試劑量低于說明書要求量。 2、解決辦法: 1) 手工加蒸餾水洗板時(shí),要避免吸頭接觸微孔,常更換新的蒸餾水。 2) 洗板時(shí)要確保每孔都注滿蒸餾水(約400ul),且至少洗板五次。 3) 嚴(yán)格按說明書要求操作,每次取樣要更換吸頭。 4) 控制孵育溫度在25℃。 5) 加樣器吸頭安放牢固避免吸樣不足,加樣時(shí)務(wù)必將吸頭內(nèi)液體打盡。
一、人(關(guān)于人的:ELISA試劑盒)的取血法
(1) 足 背中靜脈取血:助手固定動(dòng)物,將其后肢膝關(guān)節(jié)伸直捉到實(shí)驗(yàn)者面前,實(shí)驗(yàn)者將動(dòng)物腳背面用酒精消毒,找出背中足靜脈后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的 趾 端,右手拿注射器針刺入靜脈。拔針后立即出血,呈半球狀的隆起。采血后,用紗布或脫脂棉壓迫。反復(fù)取血時(shí),兩后肢交替使用。
(2)心臟取血:豚鼠的心臟取血法與兔的采血方法相似。
二、血清和血漿的制備方法
血清和血漿均是不含細(xì)胞(包括血小板)等有形成分的血液液體部分,其主要區(qū)別是血清不含凝血因子和血小板,血漿則含有凝血因子,它們的制備方法如下:
(1)血清的制備:獲得的血液不能抗凝,盛于離心管或可以離心的器皿中,靜置或置37℃環(huán)境中促其凝固,待血液凝固后,將其平衡后離心(一般為3000rpm,離心 5~10min),得到的上清液即為血清,可小心將上清吸出(注意切勿吸出細(xì)胞成分),分裝備用。
(2)血漿制備:在盛血的容器中先加人一定比例的抗凝劑(抗凝劑:血液 = 1:9,將血液加到一定量后顛倒混勻,離心(離心條件同上)后所得的上清液即為血漿。初用者將上清移至另一清潔容器,吸出血漿時(shí)用毛細(xì)吸管貼著液面逐漸往下吸,切忌不能吸起細(xì)胞成分。
(3)富含血小板血漿制備:將獲得的血液經(jīng)800rpm,離心5min,其上清即為富含血小板血漿。
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