鹽克倫特羅檢測試劑盒

 產品用途：可快速定性、定量檢測豬尿、羊尿、牛尿、豬肉、豬肝、羊肉、羊肝、牛肉等樣本中的克倫特羅。
產品特點：                 1、靈敏度高，試劑盒靈敏度為0.03ppb；                 2、室溫條件即可完成檢測實驗；                 3、30min內即可完成檢測試驗。

產品說明： 一、概要

       克倫特羅屬于β-興奮劑類藥物，俗稱瘦肉精，可提高胴體瘦肉率，曾被廣泛添加于飼料中。人食用了含克倫特羅殘留的動物性食品，會出現肌肉震顫、心悸、過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發燒、顫栗等癥狀，世界各國已明令禁止其使用。克倫特羅酶聯免疫試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于大批量樣品篩查。
二、試驗原理

       待測樣品中的克倫特羅殘留與微孔預包被的抗原共同競爭酶結合特異性抗體，通過酶催化顯色，如果克倫特羅含量少，顯色深，反之顯色淺。
三、適用范圍

        可定性、定量檢測豬尿、羊尿、牛尿、豬肉、豬肝、羊肉、羊肝、牛肉等樣本中的克倫特羅。
四、使用單位需自備的設備及試劑
設備：┅┅酶標儀450nm/630nm┅┅離心機（4000g)┅┅微量移液器：┅┅計時器試劑：┅┅三氯乙酸┅┅氫氧化鈉 五、提供的材料與試劑  

組份名稱	規格	備注
酶標板	96T	其它各規格裝量按比例增加或減少，具體裝量以實物為準。
標準品×6瓶*	1mL
CLE酶標Ⅱ抗濃縮液（11×)	0.8mL
CLE抗體工作液	8mL
CLE緩沖液A	4mL
CLE緩沖液B	4mL
底物A液	7mL
底物B液	7mL
終止液	7mL
濃縮洗滌液（20×）	25mL

*注：標準品濃度分別為0ppb、0.03ppb、0.09ppb、0.27ppb、0.81ppb、2.43ppb。
六、溶液的配制

配液1: 洗滌工作液

用去離子水將濃縮洗滌液（20×）按1 : 19體積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液（25×）加19份去離子水。用于酶標板的洗滌，洗滌工作液在4℃環境可保存一個月。

配液2: 組織提取液      

       稱取1 g三氯乙酸，加入100 mL去離子水充分溶解。

配液3: 0.5 M 氫氧化鈉溶液

       稱取2 g氫氧化鈉，加入100 mL去離子水充分溶解。

注：組織提取液、0.5 M 氫氧化鈉溶液室溫條件下可保存2周，過期需重新配制！
七、樣本前處理

（一）豬尿、羊尿（稀釋系數：2）

┅┅檢測前需在樣品孔內先加入20 μL克倫特羅緩沖液A；

┅┅取20 μL尿樣進行檢測。

（二）牛尿（稀釋系數：2）

┅┅檢測前需在樣品孔內先加入20 μL克倫特羅緩沖液B；

┅┅取20 μL尿樣進行檢測。

注：若尿樣渾濁，可4000 g離心5 min后取上清液進行檢測。（三）組織（豬肉、豬肝、羊肉、羊肝、牛肉）（稀釋系數：4）注：此方法處理的樣本可同時檢測克倫特羅、克倫特羅、沙丁胺醇！┅┅準確稱取2±0.01g新鮮組織樣本于50mL離心管中；

┅┅加入3 mL洗滌工作液（配液1），再加入3 mL組織提取液（配液2），高速渦動1 min；

┅┅4000 g以上離心5 min；

┅┅取1 mL中間清液于新的離心管中；

注：避免取到上、下層固體，否則影響檢測結果！

┅┅加入40 μL 0.5 M 氫氧化鈉溶液（配液3），渦動10 s混勻；

┅┅4000 g以上離心5 min；

┅┅取40 μL進行檢測。

八、檢測步驟1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（25±2℃）平衡2h左右，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、將板條插入酶標板架上，并記錄下各標準品和樣品的位置，建議均做雙孔平行，未使用的板條用自封袋密封后，立即保存于2-8℃環境中；3、加標準品：將40 μL各標準品工作液分別加入對應的標準品孔中；

4、檢測豬尿、羊尿：將20 μL克倫特羅緩沖液A加入樣品孔，再加入20 μL尿樣；

5、檢測牛尿：將20 μL克倫特羅緩沖液B加入樣品孔，再加入20 μL尿樣；6、檢測組織：將40 μL樣品加入樣品孔中；7、克倫特羅酶標Ⅱ抗濃縮液與抗體工作液的混合：按1:10體積比混合（取1份克倫特羅酶標Ⅱ抗濃縮液+10份克倫特羅抗體工作液），輕柔混勻；注：根據所需用量現用現配，混勻后立即使用，建議用排槍加樣！8、每孔加入60 μL酶標Ⅱ抗--抗體混合液（見9.6）；9、蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板10 s，充分混勻，室溫下（25±2℃）避光反應30 min；10、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液260μL/孔，充分洗滌4次，每次浸泡15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。11、顯色：立即在每孔中加入100 μL底物A、B混合液；蓋好蓋板膜，輕輕振蕩酶標板10 s，充分混勻，室溫下（25±2℃）避光反應15-20 min；注：底物A液、底物B液按體積1:1混合，必須充分混勻，混合液在5 min內使用，避免使用金屬盛裝、攪拌試劑！

12、終止：揭開蓋板膜，每孔中加入50 μL終止液，輕輕振蕩酶標板10 s，充分混勻；

13、讀數：終止后5 min內用酶標儀在雙波長450 nm、630 nm下讀取酶標板吸光度值。

九、結果判定

1. 各標準品（或樣品）的平均吸光度值，除以零標（濃度為0 ppb的標準品）吸光度值，乘以100，可以得到各標準品對應的吸光度的百分比：

2. 將各標準品所得值輸入半對數系統中，與對應各標準品濃度可以擬合標準曲線，請參見“標準曲線參考圖”。

3. 將樣品吸光度的百分比代入標準曲線，可得出樣品對應的濃度，再乘以相應樣品的稀釋倍數，方得樣品實際含量。

十、試劑盒參數試劑盒靈敏度：0.03 ppb精密度：試劑盒吸光度板內誤差小于5%，板間誤差小于10%。回收率：    豬尿、羊尿………………90%±20%牛尿………………………±20%    組織………………………90%±30% 樣品檢測限：組織、豬尿、牛尿、羊尿…………約0.5ppb 特異性：克倫特羅酶聯免疫試劑盒的特異性是通過與相應的物質進行交叉反應試驗來確定的，結果如下：克倫特羅……………..…溴布特羅……………......101%西馬特羅、沙丁胺醇、特布他林、萊克多巴胺、馬布特羅............................................<0.1 %標準曲線參考圖注：以B/B0（B代表吸光度值）的百分比的半對數為縱坐標，以標準品濃度為橫坐標繪制曲線圖；因環境溫濕度、人員操作、分析軟件等因素均可導致吸光度值及曲線形狀發生變化，此圖僅供參考。十一、注意事項1、試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。3、每加一種試劑前需將其搖勻。4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。6、儲存條件   保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.8（A450nm<0.8）時，表示試劑可能變質。8、在加入顯色液后，一般顯色時間為15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min（或更長）。反之，則減短反應時間。9、濃縮洗滌液如有結晶屬正常現象，請加熱溶解后使用。10、該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。11、本試劑盒應用于篩查實際樣品，檢測若為陽性樣品，應該用另一種方法如HPLC或LC/MS加以確證。十二、貯藏條件及保存期    貯藏條件：保存試劑盒于2～8℃。保存期：該產品有效期為12個月。

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