透析已成為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)室簡(jiǎn)便常用的分離純化技術(shù)之一。在生物大分子的制備過程中，除鹽、除少量溶劑、除去生物小分子雜質(zhì)和濃縮樣品等都要用到透析的技術(shù)。
透析只需要使用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀，將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi)，將此透析袋浸入水或緩沖液中，樣品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋內(nèi)，而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外，直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱為“保留液”，袋（膜）外的溶液稱為“滲出液”或“透析液”。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度，正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度，還正比于膜的面積和溫度，通常是4℃透析，升高溫度可加快透析速度。
透析膜可用動(dòng)物膜和玻璃紙等，但用的多的還是用纖維素（再生纖維素RC、纖維素酯CE、PVDF等）制成的透析膜，目前常用的是美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司spectrum和美國unio Carbide聯(lián)合碳化物公司，各種尺寸的透析管，截留分子量MwCO（即留在透析袋內(nèi)的生物大分子的分子量，縮寫為MwCO）大概有100、500、1000、2000、3500、8000、10000、15000、20000、25000、50000、100000、250000、500000、1000000等種類，單位為道爾頓（D）。
商品透析袋制成管狀，其扁平寬度為8 mm～77 mm不等。為防干裂，出廠時(shí)都用10％的甘油處理過，并含有極微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì)，它們對(duì)蛋白質(zhì)和其它生物活性物質(zhì)有害，用前必須除去。
1.將透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度（10-20cm）的小段，即成透析袋。
2.在大體積的2%（m/v)碳酸氫鈉和1mmol/LEDTA(PH=8)中將透析袋煮沸10min。
3.將透析袋用蒸餾水徹底漂洗。
4.將透析袋置1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min。
5.透析袋冷卻后存放于4度，應(yīng)確保透析袋始終浸沒在液體中。
注：從此步起用透析袋時(shí)一定要戴手套操作。
6.在使用之前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗。
注：也可以將透析袋放在廣口瓶中充滿水，松動(dòng)瓶蓋，于20psi（1.40kg/cm2)高壓滅菌10min，代替第四步用1mmol/LEDTA(PH=8)中煮沸10min的操作。
使用后的透析袋洗凈后可存于4℃蒸餾水中，若長(zhǎng)時(shí)間不用，可加少量NaN2，以防長(zhǎng)菌。洗凈涼干的透析袋彎折時(shí)易裂口，用時(shí)必須仔細(xì)檢查，不漏時(shí)方可重復(fù)使用。
新透析袋如不作如上的特殊處理，則可用沸水煮五至十分鐘，再用蒸餾水洗凈，即可使用。
美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的透析袋大部分是預(yù)處理過的，即用型，使用前只需用蒸餾水沖洗即可使用，spectra/por7系列和生物技術(shù)級(jí)的透析袋基本不含硫化物和重金屬離子。
使用時(shí)，一端用橡皮筋或線繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊，由另一端灌滿水，用手指稍加壓，檢查不漏，方可裝入待透析液，通常要留三分之一至一半的空間，以防透析過程中，透析的小分子量較大時(shí)，袋外的水和緩沖液過量進(jìn)入袋內(nèi)將袋漲破。含鹽量很高的蛋白質(zhì)溶液透析過夜時(shí)，體積增加50％是正常的。為了加快透析速度，除多次更換透析液外，還可使用磁子攪拌。透析的容器要大一些，可以使用大燒杯、大量筒和塑料桶。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。
檢查透析效果的方法是：用1％BaCl2檢查(NH4)2SO4，用1％AgNO3 檢查NaCl、KCl等。
為了提高透析效率，還可以使用各種透析裝置。使用者也可以自行設(shè)計(jì)與制作各種簡(jiǎn)易的透析裝置。美國美國光譜醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的各種型號(hào)的透析設(shè)備，由于使用對(duì)流透析的原理，使透析速度和效率大大提高。
選用透析袋需要知道目的物質(zhì)的分子量，每次處理的樣品量，同一批次的平行試驗(yàn)，是否需要保持目的物質(zhì)的活性來選擇
正確選擇透析膜
透析成功進(jìn)行的關(guān)鍵是在適當(dāng)?shù)臈l件下選用的膜。選擇時(shí)可參照下列六步：
·根據(jù)目的選擇膜的等級(jí)（生物技術(shù)或標(biāo)準(zhǔn)）
·根據(jù)溶液的化學(xué)特性選擇膜材質(zhì)（CE、RC）—參見化學(xué)相容性表格
·根據(jù)使用方法選擇產(chǎn)品類型（管狀、即用型）
·根據(jù)溶質(zhì)分子量在18種MWCO中選擇
·根據(jù)處理量在多種尺寸（即用型透析裝置）或多種寬度（管狀）中選擇
·根據(jù)目的選擇膜預(yù)處理方式
關(guān)鍵的選擇
正確選擇合適的截留分子量
截留分子量的選擇是以預(yù)留在膜內(nèi)的大分子的分子量和將要被除去的小分子污染物的分子量為基礎(chǔ)的。使用Spectra/Por？膜時(shí)，為達(dá)到合理有效的分離，需分離的兩種物質(zhì)分子量的比率至少為25。
選擇殘留分子量的經(jīng)驗(yàn)法則：選擇截留分子量值約為要保留的大分子分子量的一半，以獲得至少90%的保留率。
膜的化學(xué)相容性表格
化學(xué)相容性表格主要用作使用指導(dǎo)，不作為化學(xué)相容性的保證。溫度，濃度，長(zhǎng)時(shí)間曝光等因素的改變可能影響產(chǎn)品的使用。建議您自設(shè)條件進(jìn)行測(cè)試。
正確選擇扁平寬度
透析管扁平寬度的選擇取決于樣品的體積和透析容量。較小的透析管透析更快；較大的透析管因擴(kuò)散距離較長(zhǎng)透析較慢。為易于使用，建議使用總長(zhǎng)（包括閉合夾和頂部空間）為大約10—15厘米的膜管。
目錄和包裝標(biāo)簽都提供“體積/長(zhǎng)度”的比例（ml/cm），供您在選擇時(shí)參考。
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