HPLC常見問題和解決方法總匯

原 因

解決方法

1、電源問題

1、接通電源，開機

2、保險絲被燒壞

2、更換保險絲

3、控制器設定不正確或設定失敗

3、a、采取恰當的設定

b、修理或更換控制器

4、柱塞桿折斷

4、更換柱塞桿

5、泵頭內有空氣

5、溶劑脫氣、啟動泵抽出空氣

6、流動相不足

6、a、補充流動相

b、更換入口濾頭

7、單向閥損壞

7、更換單向閥

8、漏液

8、擰緊或更換手緊接頭

原 因

解決方法

1、儀表損壞

1、更換儀表

2、壓力傳感器損壞

2、更換壓力傳感器

原 因

解決方法

1、流速設定過高

1、調整流速設定

2、柱前篩板堵塞

2、a、在允許情況下反沖色譜柱

b、更換篩板

c、更換色譜柱

3、流動相使用不當或緩沖鹽的結晶沉淀

3、a、使用恰當的流動相

b、沖洗色譜柱

4、色譜柱選擇不當

4、選擇恰當的色譜柱

5、進樣閥損壞

5、清洗或更換進樣閥

6、柱溫過低

6、提高溫度

7、控制器失常

7、修理或更換控制器

8、保護柱阻塞

8、清洗或更換保護柱

9、在線過濾器阻塞

9、清洗或更換在線過濾器

原 因

解決方法

1、流速設定過低

1、調整流速

2、系統漏液

2、確定漏液位置并維修

3、色譜柱選擇不當

3、選擇恰當的色譜柱

4、柱溫過高

4、降低溫度

5、控制器失常

5、維修或更換控制器

原 因

解決方法

1、見列表C

1、見列表C

原 因

解決方法

1、見列表A、B

1、見列表A、B

原 因

解決方法

1、見列表D

1、見列表D

原 因

解決方法

1、泵中有氣體

1、a、溶劑脫氣

b、從泵中除去氣體

2、單向閥損壞

2、更換單向閥

3、泵密封損壞

3、更換泵密封

4、脫氣不充分

4、a、溶劑脫氣

b、改變脫氣方法（使用在線脫氣法等）

5、系統漏液

5、確定漏液位置并維修

6、使用梯度洗脫

6、由于流動相粘度的變化引起的壓力波動

原 因

解決方法

1、接頭松動

1、擰緊

2、接頭磨損

2、更換

3、接頭過緊

3、a、擰松，再重新擰緊

b、更換

4、接頭被污染

4、a、拆下清洗

b、更換

5、部件不匹配

5、使用同一品牌的配件

原 因

解決方法

1、單向閥松動

1、a、擰緊單向閥（不必擰的過緊）

b、更換單向閥

2、接頭松動

2、擰緊接頭（不必擰的過緊）

3、混合器密封損壞

3、a、更換混合器密封

b、更換混合器

4、泵密封損壞

4、維修或更換泵密封件

5、壓力傳感器損壞

5、維修或更換壓力傳感器

6、脈沖阻尼器損壞

6、更換脈沖阻尼器

7、比例閥損壞

7、a、檢查隔膜，如果漏液立即更換

b、檢查手緊接頭，損壞的立即更換

8、放空閥的損壞

8、a、擰緊放空閥

b、更換放空閥

原 因

解決方法

1、轉子密封損壞

1、重新安裝或更換進樣閥

2、定量環阻塞

2、更換定量環

3、進樣口密封松動

3、調整

4、進樣針頭尺寸不合適

4、使用恰當的進樣針

5、廢液管中產生虹吸

5、保持廢液管高于廢液液面

6、廢液管阻塞

6、更換或疏通廢液管

原 因

解決方法

1、尾端接頭松動

1、擰緊接頭

2、卡套內有填料

2、拆下、清洗卡套、重新安裝

3、篩板厚度不合適

3、使用合適的篩板（參考下表）

物質粒徑

篩板孔徑

3-4u

0.5u

5-20u

2u

原 因

解決方法

1、流通池墊片損壞

1、a、避免過大的背景壓力（壓力降）

b、更換墊片

2、流通池窗破碎

2、更換窗口

3、手緊接頭漏液

3、擰緊或更換

4、廢液管阻塞

4、更換廢液管

5、流通池阻塞

5、重新安裝或更換

原 因

解決方法

1、篩板阻塞

1、a、反沖色譜柱

b、更換進口篩板

c、更換色譜柱

2、色譜柱塌陷

2、填充色譜柱

3、干擾峰

3、a、使用更長的色譜柱

b、改變流動相或更換色譜柱

4、流動相PH選擇錯誤

4、調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱峰

5、樣品與填料表面的溶化點發生反應圖

5、a、加入離子對試劑或堿性揮發性修飾劑

b、更改色譜柱

原 因

解決方法

1、柱溫低

1、升高柱溫

2、樣品溶劑選擇不恰當

2、使用流動相作為樣品溶劑

3、樣品過載

3、降低樣品含量

4、色譜柱損壞

4、見A1、A2

原 因

解決方法

1、          保護柱或分析柱污染

圖

1、取下保護柱再進行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來清洗。如果問題仍然存在，可能是柱子被強保留物質污染，運用適當的再生措施。如果問題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。

2、樣品溶劑不溶于流動相

2、改變樣品溶劑。如果可能采取流動相作為樣品溶劑。

原 因

解決方法

1、樣品過載

1、減少樣品載量

原 因

解決方法

1、樣品溶劑選擇不恰當

1、a、減少進樣體積

b、運用低極性樣品溶劑

原 因

解決方法

1、柱外效應

1、a、調整系統連接（使用更短、內徑更小的管路）

b、使用小體積的流通池

原 因

解決方法

1、二級保留效應，反相模式

1、a、加入三乙胺（或堿性樣品）

b、加入乙酸（或酸性樣品）

c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）

d、更換一支柱子

2、二級保留效應，正相模式

2、a、加入三乙胺（或堿性樣品）

b、加入乙酸（或酸性樣品）

c、加入水（或多官能團化合物）

d、試用另一種方法

3、二級保留效應，離子對

3、加入三乙胺（或堿性樣品）

原 因

解決方法

1、緩沖不合適

1、a、使用濃度50value="100" hasspace="False" negative="True" numbertype="1" tcsc="0">-100mM的緩沖液

b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液

原 因

解決方法

1、樣品中有其他組份

1、正常

2、前一次進樣的洗脫峰

2、a、增加運行時間或梯度斜率

b、提高流速

3、空位或鬼峰

3、a、檢查流動相是否純凈

b、使用流動相作為樣品溶劑

c、減少進樣體積

原 因

解決方法

1、溫控不當

1、調好柱溫

2、流動相組分變化

2、防止變化（蒸發、反應等）

3、色譜柱沒有平衡

3、在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱

原 因

解決方法

1、流速變化

1、重新設定流速

2、泵中有氣泡

2、從泵中除去氣泡

3、流動相選擇不恰當

3、a、更換合適的流動相

b、選擇合適的混合流動相

原 因

解決方法

1、柱溫波動。（即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。）

1、控制好柱子和流動相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器

圖

2、流動相不均勻。（流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導致的漂移。）

2、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣，使用中使用氦氣。

3、流通池被污染或有氣體

3、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）

4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產生噪音基線）

4、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。

5、流動相配比不當或流速變化

5、更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。

6、柱平衡慢，特別是流動相發生變化時

6、用中等強度的溶劑進行沖洗，更改流動相時，在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。

7、流動相污染、變質或由低品質溶劑配成

7、檢查流動相的組成。使用高品質的化學試劑及HPLC級的溶劑

8、樣品中有強保留的物質（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個逐步升高的基線。

8、使用保護柱，如有必要，在進樣之間或在分析過程中，定期用強溶劑沖洗柱子。

9、使用循環溶劑，但檢測器未調整。

9、重新設定基線。當檢測器動力學范圍發生變化時，使用新的流動相。

10、檢測器沒有設定在最大吸收波長處。

10、將波長調整至最大吸收波長處

原 因

解決方法

1、在流動相、檢測器或泵中有空氣

1、流動相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。

2、漏液

圖

2、見第三部分。檢查管路接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。

3、流動相混合不完全

3、用手搖動使混合均勻或使用低粘度的溶劑

4、溫度影響（柱溫過高，檢測器未加熱）

4、減少差異或加上熱交換器

5、在同一條線上有其他電子設備

5、斷開LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來自于外部，加以更正。

6、泵振動

6、在系統中加入脈沖阻尼器

原 因

解決方法

1、          漏液

圖

1、見第三部分。檢查接頭是否松動，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。

2、流動相污染、變質或由低質溶劑配成

2、檢查流動相的組成。

3、流動相各溶劑不相溶

3、選擇互溶的流動相

4、檢測器/記錄儀電子元件的問題

4、斷開檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。

5、系統內有氣泡

5、用強極性溶液清洗系統

6、檢測器內有氣泡

6、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節器

7、流通池污染（即使是極少的污染物也會產生噪音。）

7、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池

8、檢測器燈能量不足

8、更換燈

9、色譜柱填料流失或阻塞

9、更換色譜柱

10、流動相混合不均勻或混合器工作不正常

10、維修或更換混合器，在流動相不走梯度時，建議不使用泵的混合裝置

原 因

解決方法

1、流動相組成變化

1、重新制備新的流動相

2、流動相流速太低

2、調節流速

3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）

3、見section 3。檢查接頭是否松動、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。

4、檢測器設定不正確

4、調整設定

5、柱外效應影響

a、柱子過載

b、檢測器對反應時間或池體積響應過大

c、柱子與檢測器之間的管路太長或管路內徑太大

d、記錄儀響應時間太長

圖

5、

a、 小體積進樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品

b、減少響應時間或使用更小的流通池

c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路

d、減少響應時間

6、緩沖液濃度太低

6、增加濃度

7、保護柱污染或失效

7、更換保護柱

8、色譜柱污染或失效，塔板數較低

8、更換同樣類型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。

9、柱入口塌陷

9、打開柱入口，填補塌陷或更換柱子

10、呈現兩個或多個未被完全分離的物質的峰

10、選擇其它類型的色譜柱以改善分離效果

11、柱溫過低

11、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過value="75" hasspace="False" negative="False" numbertype="1" tcsc="0">75℃

12、檢測器時間常數太大

12、使用較小的時間常數

原 因

解決方法

1、流動相污染或變質（引起保留時間變化）

1、重新配置流動相

2、保護柱或分析柱阻塞

圖

2、去掉保護柱進行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進行反沖。如果問題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序。如果問題仍然存在，進口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。

原 因

解決方法

1、檢測器衰減設定過高

1、減少衰減的設定

2、檢測器時間常數設定太大

2、設定較小的時間常數

3、進樣量太少

3、增大進樣量

4、記錄儀連接不當

4、使用正確的連接

原 因

解決方法

1、檢測器衰減設定過低

1、采取較大的衰減

2、進樣過多

2、減少進樣量

3、記錄儀連接不正確

3、正確連接記錄儀

原 因

解決方法

1、轉子密封損壞

1、更換或調整轉子密封

2、轉子太緊

2、調整轉子的松緊度

原 因

解決方法

1、進樣閥安裝不當

1、重新安裝

2、定量環阻塞

2、清洗或更換定量環

3、進樣器污染

3、清洗或更換進樣器

4、管路阻塞

4、清洗或更換管路

原 因

解決方法

1、無壓力（或電源）

1、提供恰當的壓力（電源）

2、轉子太緊

2、調整轉子的松緊度

3、進樣閥安裝不當

3、重新安裝

原 因

解決方法

1、阻塞

1、清洗或更換阻塞部件

2、機械故障

2、見隨機維修手冊

3、控制器故障

3、維修或更換控制器

原 因

解決方法

1、漏液

1、見section 3

2、濺出

2、a、檢查廢液瓶是否已滿

b、找到濺出的部位并清洗干凈

原 因

解決方法

1、儀器過熱

1、a、檢查并調節通風設施

b、檢查并調節溫度設定

c、關掉儀器，查找維修手冊

原 因

解決方法

1、壓力不正常

1、見section 2

2、柱溫箱問題

2、

a、檢查并調節設定

b、參照用戶手冊

3、檢測器燈失效

3、更換燈

原 因

解決方法

1、壓力超出極限值

1、

a、檢查是否阻塞

b、檢查并調節極限值的設定

2、其它警示燈

2、見用戶手冊

原 因

解決方法

1、溶劑泄漏/濺出

1、找到并解決

2、其它警告音

2、見用戶手冊

原 因

解決方法

1、軸承失效

1、見用戶手冊

2、潤滑不夠

2、進行恰當的潤滑

3、機械故障

3、見用戶手冊

問 題

維 護

1、進口篩板阻塞

1、

a、更換（3-6個月）

b、過濾流動相，0.5u濾膜

2、氣泡

2、流動相脫氣

問 題

維 護

1、氣泡

1、流動相脫氣

2、泵密封損壞

2、更換（3個月）

3、單向閥損壞

3、過濾流動相，運用在線過濾，準備備用單向閥

問 題

維 護

1、轉子密封損壞

1、

a、不要擰的過緊

b、過濾樣品

問 題

維 護

1、篩板阻塞

1、a、過濾流動相

b、過濾樣品

c、運用在線過濾或保護柱

2、柱頭塌陷

2、a、避免使用PH>8的流動相（針對大部分硅膠的柱子）

b、使用保護柱

c、使用預柱（飽和色譜柱）

問 題

維 護

1、燈失效，檢測器響應降低，噪音增大

1、更換（6個月）或準備備用燈

2、流通池有氣泡

2、a、保持流通池清潔

b、池后使用反壓抑制器

c、流動相脫氣

問 題

維 護

1、腐蝕/摩擦損壞

1、在不使用時保持系統緩沖液的清潔