水產品中孔雀石綠、硝基呋喃代謝物、氯霉素合檢

孔雀石綠、硝基呋喃代謝物、氯霉素殘留合檢前處理

液相色譜-串聯質譜法

1 應用范圍

本方法規定了水產品(魚類、蝦蟹類和貝類）中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、硝基呋喃代謝物AMOZ、SEM、AHD和AOZ、氯霉素殘留合檢的液相色譜-串聯質譜快篩方法。

2 檢測原理

由于水產品中孔雀石綠、硝基呋喃代謝物、氯霉素違禁類藥物在肌肉組織中的特殊殘留形式及其低下限的標準規定，前處理方法存在前處理時間長、操作步驟繁瑣、檢測成本高等多年來尚未解決的問題。本方法可先將硝基呋喃代謝物在10 min內快速衍生，衍生化產物可和孔雀石綠、結晶紫、氯霉素共同被另一種試劑萃取，萃取液經固相萃取凈化后，采用液相色譜-質譜聯用儀檢測，內標法定量。該方法具有以下創新點：

2.1 新型衍生化技術：可將硝基呋喃代謝物的衍生時間由原有16小時縮短至10 min內。

2.2 合檢技術：一次性前處理可同時檢測三大類殘留藥物，降低檢測成本，提高檢測效率。

2.3 將前處理時間縮短至1小時左右。

2.4 試劑用量少，對環境污染小，同時對操作人員的健康危害小。

2.5 操作簡便、快速，結果穩定可靠。

3 試劑與材料

除非另有說明，所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規定的一級水。

3.1 快速檢測試劑盒

                                                                           規格： 20樣/盒

4 儀器和設備

4.1 絞肉機/均質機、離心管架、天平、移液槍、超聲波提取器、振蕩器、離心機、可調式旋渦混合器、氮吹儀。

4.2 50 mL離心管、5 mL離心管。

4.3 微孔濾膜：0.2 μm，相。

4.4 液相色譜-串聯質譜儀。

5 樣品制備

Ø 稱取5.0 g絞碎或均質后的組織樣品于50 mL離心管中，加入3.0 mL檢測試劑A，1.0 mL衍生化試劑，充分混勻，置于65 ℃超聲波提取器中，超聲20 min（期間搖勻2~3次）。

Ø 取出后加入2.5 mL檢測試劑B，振蕩2 min混勻；再加入1管提取劑1、5.0 mL提取劑2，振蕩10 min，8000 r/min離心5 min。

Ø 用5.0 mL提取劑2活化固相萃取柱，取3.0 mL上清液（切勿取到下層）過活化后的固相萃取柱，取一支5 mL離心管接收流出液備用，并擠干柱體。用1.0 mL乙腈-乙酸銨緩沖溶液（3.18）洗脫柱子，并另取一支5 mL離心管收集洗脫液，搖動使之混合均勻備用。

硝基呋喃代謝物、氯霉素待測液：

Ø 從洗脫液管中準確移取0.5 mL洗脫液加入到流出液管中，50 ℃下氮氣吹干，殘渣用1.0 mL 水溶解，再用1.0 mL正己烷去除油脂（有需要可以萃取2次），下層水相即為硝基呋喃代謝物和氯霉素的待測液，過0.2 μm濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

孔雀石綠待測液：

Ø 從洗脫液管中準確移取0.3 mL洗脫液與0.3 mL乙酸銨緩沖溶液（3.17）混勻，得到孔雀石綠的待測液，過0.2 μm濾膜，供液相色譜-串聯質譜儀測定。

6 測定

按實驗室現用的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫、硝基呋喃代謝物和氯霉素的液相色譜-質譜條件測定即可；如有需要，可聯系生產商索要可供參考的儀器條件。

7 檢出限

本方法孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結晶紫、隱色結晶紫檢出限均為0.5 µg/kg；硝基呋喃代謝物AMOZ、SEM、AHD和AOZ的檢出限均為0.5 µg /kg；氯霉素檢出限為0.1 µg/kg。

8 含量計算關鍵點（分取比例）

8.1 孔雀石綠的分取比例是3/5，用乙酸銨緩沖液稀釋一倍，相當于3/10；

8.2 AOZ、AHD、SEM的分取比例是3/5，AMOZ的分取比例是3/10；

8.3 氯霉素的分取比例是3/5。

9 注意事項

9.1 上機測定時，及時進樣孔雀石綠；樣品前處理及檢測過程中，孔雀石綠和隱色孔雀石綠可能會發生相互轉化，出具的檢測結果應為二者檢出量之和。

9.2 做孔雀石綠、結晶紫、硝基呋喃代謝物、氯霉素多項合檢的時候，建議配制待檢項目的混標，以防向樣品中加入較多的溶劑，影響提取效率，單個樣品的加標體積不超過100 µL為宜。

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