概述
采用實時熒光PCR技術，針對致瀉大腸埃希氏菌（DEC）特異性基因設計引物和探針。PCR擴增過程中，與模板結合的探針被Taq酶分解產生熒光信號，熒光定量PCR儀根據檢測到的熒光信號繪制出實時擴增曲線，從而實現致瀉大腸埃希氏菌（DEC）在核酸水平上的菌株鑒定。
檢測步驟
1、核酸提取
加熱法：刮取一環菌落，懸浮于100μL的無菌水中，漩渦震蕩10s（如果菌落未能均勻分散，可適當延長震蕩時間），95℃或沸水浴5min，冷卻至室溫，12000rpm離心5min，吸取上清。
試劑盒法：可使用商品化的試劑盒提取細菌的基因組DNA。
2、反應體系配置
從試劑盒中取出預混液，充分融化，渦旋后短暫離心，取20μL置于PCR管或PCR板中，然后各取模板5μL分別加入PCR管或PCR板中（每種模板要使用五種預混液），蓋好管蓋或板膜，短暫離心，立即進行PCR擴增反應。
3、PCR擴增
PCR管或PCR板置于PCR儀上，推薦反應程序設定如下：反應體系為25μL，在第二步每個循環60℃時檢測熒光信號，檢測通道選擇FAM、HEX（VIC）、CY5。
注：使用ABI系列PCR儀器，如果不添加ROX
注意事項
1、實驗前請仔細閱讀說明書，規范操作。
2、本品各組成成分均不得與其他產品或不同批號產品中的相應組成成分進行混用。
3、基因變異可能會導致假陰性結果。
4、實驗室環境污染、試劑污染、樣品交叉污染都可能會造成假陽性結果。
5、恰當處理實驗過程中的廢棄物和擴增產物。
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