用途
免疫親和柱可選擇性吸附樣品液中的生物素,從而對樣品起到非常針對性的純化作用,過柱凈化后的樣品液可直接用于 UPLC或LC-MS/MS進行分析。 親和柱與UPLC或 LC-MS/MS配合使用可達到快速測定的目的,以改善信噪比,可提高檢測方法的準確度。
概述
生物素,別名 VB7、VH或輔酶 R,是一種水溶性 B組維 生素,它以羧化酶的輔酶形式微量存在于活細胞中,參與蛋白質、脂肪和糖類的代謝,是動物機體維持正常生理機能所必需的維生素之一。我國在相關標準中規定了嬰幼兒配方奶粉與調制乳粉中強化生物素的量。
原理
測定的基礎是抗原、抗體反應,抗體連接在柱體內,樣品經過離心、脫脂后,緩慢的通過生物素免疫親和柱,在免疫親和柱內生物素與抗體結合,之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結合的其他無關物質。用洗脫液洗脫生物素,然后注入到分析儀器中用于檢測。
注意事項
1.使用前,免疫親和柱需回至室溫(22~25°C)。
2.親和柱 2~8°C儲存,不得凍存。
3.不要使用過了有效日期的免疫親和柱。
4.取樣量:根據需要可以適當增加或減少取樣量,注意提取液 量要相應改變。
5.柱容量:柱容量為 1000ng,根據樣品中大致含量,適當調整上樣量,乘以相應稀釋倍數。例如:奶粉中生物素含量大于2500μg/kg(即未乘以稀釋倍數之前的檢測結果大于1000μg/L)時,上樣量可以降低為 5mL,此時稀釋倍數為5。
6.pH:親和柱的上樣溶液 pH需在 6~8之間,若偏離此范圍需要用鹽酸或氫氧化鈉調節 pH。
7.上機檢測時的溶劑與流動相保持一致可以消除溶劑效應的影響。
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