【摘要】目的建立辛夷藥材中桉油精含量的測定方法方法，滕州華普采用水勻漿破碎，揮發(fā)油提取器中回流提取，ＦＦＡＰ毛細(xì)管色譜柱(３０ｍｍ×０．３２ｍｍ，０．３２μｍ)分離，火焰離子化檢測器(ＦＩＤ)檢測，以苯乙烯為內(nèi)標(biāo)，毛細(xì)管氣相色譜法測定辛夷藥材中桉油精的含量。結(jié)果在桉油精進(jìn)樣量為０．４～３．０ｍｇ時(shí)有良好的線性關(guān)系(r＝０．９９９８)；加標(biāo)平均回收率為９９．３％，RSD為１．８％。結(jié)論加水勻漿破碎可有效地防止破碎過程中桉油精的揮發(fā)。不同產(chǎn)地辛夷藥材桉油精含量相差很大。 辛夷，又名紫玉蘭、望春花，屬木蘭科木蘭屬落葉喬木［１］，其花蕾入藥稱辛夷。有散風(fēng)寒、通鼻竅之［２］。辛夷揮發(fā)油是一種重要的天然香料，廣泛用于醫(yī)藥、日化和香精香料等行業(yè)［３］。辛夷揮發(fā)油的測定及化學(xué)成分的質(zhì)譜分析已有報(bào)道，提取方法有水蒸氣蒸餾法［４］、浸膏法［５］、超臨界ＣＯ２流萃取法［６］等，以上方法提取辛夷中揮發(fā)油時(shí)，樣品的破碎對桉油精的回收率有很大的影響［４］。桉油精是辛夷揮發(fā)油的重要組成部分，國內(nèi)對辛夷藥材桉油精含量測定的相關(guān)報(bào)道很少，２００５版《中國藥典》Ⅰ部附錄ⅩＣ給出的桉油精含量測定法使用ＰＥＧ２０Ｍ＋ＯＶ－１７混裝氣相色譜填充柱，適用于成分不太復(fù)雜的藥材和中成藥中桉油精含量測定。辛夷藥材揮發(fā)油的成分復(fù)雜，《中國藥典》的方法不能使與桉油精相鄰的峰分離。因此，本實(shí)驗(yàn)選用ＦＦＡＰ毛細(xì)管柱建立了辛夷藥材中桉油精含量的氣相色譜內(nèi)標(biāo)測定方法，采用勻漿破碎回流提取有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，確保了測定結(jié)果的真實(shí)性和準(zhǔn)確性。
1儀器和材料
華普GC-2013型氣相色譜儀、ＦＩＤ檢測器、N３０００色譜工作站；勻漿機(jī)(Ｔｈｅｖｉｒｔｉｓｃｏｍｐａｎｙ．Ｎｅｗｙｏｒｋ)，ＦＦＡＰ毛細(xì)管色譜柱。
辛夷藥材由貴陽中醫(yī)學(xué)院提供和鑒定，分別采自河南、廣西和貴州。
化學(xué)對照品桉油精(０７８８－９２０２、供含量測定用、中國藥品生物制品檢定所)；苯乙烯(化學(xué)試劑、純度大于９９％、無干擾測定峰)。其它試劑均為分析純。
2方法與結(jié)果
2.1對照品溶液的配制準(zhǔn)確稱取對照品桉油精適量，用甲醇溶解后置于１０ｍｌ容量瓶中，配制成２０ｍｇ／ｍｌ的儲(chǔ)備液，精密取出０．０５０ｍｌ儲(chǔ)備液于５．０ｍｌ的０．２５ｍｇ／ｍｌ的苯乙烯－三氯甲烷內(nèi)表液中，加水１ｍｌ，振搖提取０．５ｍｉｎ，離心，下層相為對照品溶液。
2.2樣品溶液的配制取辛夷藥材１０ｇ，精密稱量于勻漿罐中，加水１５０ｍｌ，勻漿，漿液及洗滌勻漿罐的水一并轉(zhuǎn)移到２５０ｍｌ蒸餾瓶中，加入環(huán)己烷５．０ｍｌ，于揮發(fā)油提取器［７］中回流提取４ｈ，相收集于離心試管中，離心、將上清相轉(zhuǎn)入１０ｍｌ容量瓶中，分別用２．５，２ｍｌ環(huán)己烷洗用過的提取器收集管和離心試管，離心、將上層相一并轉(zhuǎn)入１０ｍｌ容量瓶中用環(huán)己烷定容為待測溶液，精密吸取待測溶液０．２５ｍｌ，內(nèi)標(biāo)溶液５．００ｍｌ，于１０ｍｌ具塞離心試管中，加水１．０ｍｌ，振搖提取０．５ｍｉｎ，離心，下層相為供試品溶液。
2.3色譜條件用ＦＦＡＰ毛細(xì)管色譜柱(３０ｍｍ×０．３２ｍｍ，０．３２μｍ)；氮?dú)?Ｎ２)為載氣、柱前壓８０ｋＰａ；汽化室溫度２４０℃；檢測器溫度２４０℃；柱溫：８０℃保留６ｍｉｎ，以４０℃／ｍｉｎ的速率升到２２０℃，保留２ｍｉｎ；以苯乙烯為內(nèi)標(biāo)在火焰離子化檢測器(ＦＩＤ)上測定桉油精含量。
根據(jù)對照品的保留時(shí)間定性，峰面積比計(jì)算桉油精的含量。
2.4色譜柱和內(nèi)標(biāo)物的選擇分別用ＳＥ－３０，ＳＥ－５４，ＯＶ－１７０１和大口徑、小口徑的ＦＦＡＰ毛細(xì)管柱進(jìn)行對照品和樣品的測定。結(jié)果表明，桉油精在大口徑、小口徑的ＦＦＡＰ毛細(xì)管柱的峰形都很好，但樣品經(jīng)大口徑的ＦＦＡＰ毛細(xì)管柱分離，有一小峰不能與內(nèi)標(biāo)物分開。經(jīng)各種內(nèi)標(biāo)物醋酸乙酯、冰片、萘和苯乙烯比較表明，苯乙烯能與其它峰完全分開且在恰當(dāng)時(shí)間出峰。因此，選擇苯乙烯為內(nèi)標(biāo)，色譜柱為小口徑的ＦＦＡＰ毛細(xì)管柱。樣品與對照品的分析圖譜見圖１。
圖１氣相色譜圖(略)
2.5前處理方法的選擇經(jīng)不同前處理方法比較桉油精的揮發(fā)損失試驗(yàn)，結(jié)果表明：辛夷藥材在４０～４５℃烘干４ｈ，其中的桉油精揮發(fā)損失約３０％；將辛夷藥材在套環(huán)式撞擊制樣機(jī)中粉碎，撞擊使樣品破碎而同時(shí)發(fā)熱，桉油精揮發(fā)損失３０％以上；破碎的樣品于燒杯中室溫下敞開放置５ｄ桉油精全部揮發(fā)。因此，本實(shí)驗(yàn)采用加水勻漿破碎，回流提取分析辛夷藥材中的桉油精含量，有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，測定結(jié)果比干法粉碎的結(jié)果要高。
2.6提取時(shí)間的選擇取辛夷藥材１０ｇ，精密稱量于勻漿罐中，加水１５０ｍｌ，勻漿，漿液及洗滌勻漿罐的水一并轉(zhuǎn)移到２５０ｍｌ蒸餾瓶中，加入環(huán)己烷５．０ｍｌ，于揮發(fā)油提取器中回流提取，考察提取時(shí)間與提取率。結(jié)果見表１。
表1辛夷藥材中桉油精的提取率(略)
從表１可知，采用勻漿破碎后，回流提取≤４ｈ時(shí)，隨蒸餾時(shí)間的增長，出油率增高，蒸餾時(shí)間＞４ｈ后，延長蒸餾時(shí)間，出油率變化不大，且可能影響按油精的質(zhì)量。因此，辛夷藥材的蒸餾時(shí)間為４ｈ。
2.7線性關(guān)系考察配制桉油精標(biāo)準(zhǔn)溶液系列，桉油精加入量分別為０．４，０．８，１．２，１．６，２．０，２．５，３．０ｍｇ，加水１．０ｍｌ，內(nèi)標(biāo)液５．００ｍｌ，振搖提取０．５ｍｉｎ，離心，吸取下層２．０μｌ，注入氣相色譜儀測定，以相對峰面積A’／對加入桉油精ｍ(ｍｇ)進(jìn)行線性回歸，在０．４～３．０ｍｇ范圍內(nèi)，線性方程為A’＝０．６６２２m＋０．０１４９(r＝０．９９９７)。
2.8精密度試驗(yàn)與重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)取對照品溶液２．０μｌ，按色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣５次，求出桉油精的相對峰面積，RSD為０．２２％。
取同一個(gè)批號(hào)辛夷藥材制成的供試品溶液５份各２．０μｌ，按色譜條件進(jìn)行測定，連續(xù)進(jìn)樣５次，求出桉油精的相對峰面積，RSD為１．１２％。
2.9回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取辛夷藥材５ｇ，共計(jì)９份，分別加入桉油精２４．００，３０．００，３６．００ｍｇ，制備成供試品溶液，分別進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果表２。
表2回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(略)
2.10樣品測定按本實(shí)驗(yàn)建立的方法測定了河南、廣西和貴州不同產(chǎn)地的辛夷藥材，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地的藥材中桉油精的含量差異很大。
3結(jié)論
本實(shí)驗(yàn)建立的加水均漿制樣有效地防止了辛夷藥材中桉油精的揮發(fā)，確保了測定結(jié)果的可靠性。
關(guān)鍵詞：蜂膠分析 蜂膠中化學(xué)成分
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