【產(chǎn)品簡介】
硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長的添加劑。呋喃唑酮在1995年被禁用。由于硝基呋喃類藥物在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物則能存留較長的一段時間，所以管理部門就以檢測代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測硝基呋喃類殘留的目的。
【測定原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測水產(chǎn)等組織樣本中的AOZ，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來進(jìn)行的，樣本中的AOZ和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物的衍生物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的AOZ含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出呋喃唑酮代謝物含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī) 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.02ppb
檢測時間： 90min
樣本檢測下限：
組織、肝臟………………………………… 0.04ppb
蜂蜜、牛奶、腸衣 ……………………… 0.04ppb
魚/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，
檢測下限為0.1ppb
交叉反應(yīng)率：
呋喃唑酮代謝物 …………………………
呋喃它酮代謝物 …………………………﹤0.1%
呋喃妥因代謝物 …………………………﹤0.1%
呋喃西林代謝物 …………………………﹤0.1%
回收率：
組織、肝臟 ……………………… 90%±10%
蜂蜜、牛奶、腸衣 …………………… 75%±15%
【試劑盒組成】
1、 微量測試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.02ppb、0.06ppb、0.18ppb、0.54ppb、1.62ppb
3、 酶標(biāo)記物 7ml………………………紅色帽
4、 抗體工作液 7ml………………………綠色帽
5、 底物A液 7 ml………………………白色帽
6、 底物B液 7 ml………………………黑色帽
7、 終止液 7 ml………………………黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml………………白色帽
9、 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml……………… 透明帽
10、 衍生化試劑 10ml ……………… 白色帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：單道20µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試 劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、磷酸氫二鉀、ZnSO4•7H2O、亞硝基鐵(K2Fe（CN）5•NO•3H2O）
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測的組織樣本包括：動物組織、
禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、豬、牛、羊、兔、魚、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制：
配液1、 用去離子水將2×濃縮復(fù)溶液按1：1 稀釋，用于提取后的樣本復(fù)溶（按需用量配制）。
配液2、 C液（牛奶樣本）：稱10.7g亞硝基鐵用去離子水定溶至100ml。
配液3、 D液（牛奶樣本）：稱28.8g 硫酸鋅用去離子水定溶至100ml。
配液4、 0.1MK2HPO4 稱11.4g K2HPO4•3H2O
加去離子水溶解定容至500ml。
配液5、1M HCl溶液
取8.6ml濃HCl加去離子水定溶至100ml。
配液6、1M NaOH溶液
取4g NaOH加去離子水定容至100ml。
樣本的處理方法：
(a) 奶樣
1、 取出5ml的奶樣本到玻璃離心管中,分別加入C液和D液各250µl。
2、 用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機(jī)4000r/min以上離心10min(4-12℃).若沒有恒溫離心機(jī),則先將樣本降溫至大約8℃,然后離心。
3、 接(b)的描述方法
(b) 組織、蜂蜜、腸衣、肝臟
1、 取1±0.05g的均質(zhì)樣本(組織、蜂蜜、腸衣、肝臟)，牛奶的離心上清液1.1ml（相當(dāng)1ml
奶樣），分別加入4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100µl衍生化試劑，充分振蕩。
2、 置于37℃過夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育(2h)；
3、 分別加入5ml 0.1M K2HPO4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯，充分振蕩2min；
4、 在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
5、 取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮?dú)?空氣吹干。
6、 用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋
好的復(fù)溶液充分混合30s；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
7、 取50µl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：2
（c）特殊樣本(油炸熟食、非油炸熟肉)的處理方法
1、 取1±0.05g的均質(zhì)樣本于50ml離心管中，加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水，震蕩2min, 4000r/min離心5min，傾倒出全部液體，再加入5 ml乙腈和5ml 正己烷，震蕩2min,4000r/min離心5min傾倒出全部液體。
2、 在處理后的樣本離心管中加入4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100µl衍生化試劑，充分振蕩。
3、 接（b）第2步描述方法
【酶標(biāo)免疫分析程序】
1、 從4℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑，置室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出需要數(shù)量的微孔及框架，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、 編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
5、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后入酶標(biāo)記物50µl，加入抗體50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕震蕩混勻。25℃環(huán)境中反應(yīng)60min。
6、 取出將孔內(nèi)液體甩干，用洗液250µl/孔洗板4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：每孔加入底物A液50µl，再加底物B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色30min。
8、 測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。
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