鹽酸克倫特羅酶聯免疫檢測試劑盒

一、概要
    克倫特羅（Clenbuterol）屬于β-興奮劑，因為該藥可以提高瘦肉率，減少脂肪沉積和促進動物生長，被一些畜牧養殖企業作為養殖促進劑非法使用。人食用了飼喂克倫特羅作為添加劑的動物所產生的畜產品后，殘留的克倫特羅可導致人體肌肉震顫、心悸、神經過敏、頭痛、目眩、惡心、嘔吐、發燒、戰栗等癥狀，對消費者的健康造成極大危害。因此世界許多國家現已被明令禁止在飼料中添加克倫特羅來增加動物的瘦肉率。HPLC或GC-MS一直用作檢測β興奮劑的方法，但是其前處理步驟費用昂貴；而使用酶聯免疫檢測試劑盒方法則可以經濟、快速地檢測尿，血清，肌肉，肝臟及飼料中的CLE。
   本試劑盒是應用ELISA技術研發而成的檢測產品，操作時間短于45min，能限度地減少操作誤差和工作強度。
二、試驗原理
 本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被克倫特羅抗原，樣本殘留的克倫特羅和微孔條上預包被的抗原競爭抗克倫特羅抗體，加入酶標二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物克倫特羅負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中克倫特羅的含量。
三、適用范圍
 可定性、定量檢測動物組織、飼料、尿液、血清等樣本中克倫特羅的殘留量。
四、交叉反應率
克倫特羅 ………………………………………………
特普他林 ……………………………………………小于1%
非諾特羅 ……………………………………………小于1%
馬布特羅 ……………………………………………小于1%
西馬特羅 …………………………………………小于1%
溴布特羅 ……………………………………………小于1%
塞曼特羅 ……………………………………………小于1%
五、操作步驟
 1、將所需試劑從冷藏環境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2、取出需要數量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
 5、加標準品/樣本：加標準品/樣本20l/孔到對應的微孔中，再加入克倫特羅酶標物50l/孔，再加入克倫特羅抗試劑80ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反30min
 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液300l/孔，充分洗滌5次，每次間隔30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15～20min。
 8、測定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.1ppb
樣本檢測限：
組織樣品………………………………………0.3ppb
尿液或血清樣品………………………………0.1ppb
飼料樣品……………………………………5ppb
回收率：
組織樣品………………………………………80±10%
尿液或血清樣品………………………………80±10%
飼料樣品…………………………………80±10%
精密度：試劑盒的變異系數均小于10%
七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件：保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進自封袋重新密封。標準物質和無色的發色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min（或更長），但不得超過40min。反之，則減短反應時間。
9、該試劑盒反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發生變化。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產品有效期為12個月。

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