近日，中國熱科院生物所蛋白質組學研究團隊在高濃度瓊脂糖凝膠制備及應用方面取得新進展，開發出一種分離低分子量核酸和蛋白質的高濃度瓊脂糖凝膠制備和電泳方法。通過該方法可制備濃度高達14%的瓊脂糖凝膠，分離相差2-bp或2-nt的DNA片段和實現植物復雜蛋白質的高分辨率分離。
核酸和蛋白質的凝膠分離一直是分子生物學研究的重要組成，但低/中濃度瓊脂糖凝膠電泳對于低分子量核酸和蛋白質的分離達不到聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）的高分辨率。針對這一難題，本研究團隊利用高溫高壓制備了充分溶解的高濃度瓊脂糖凝膠（HAG），發明了一種簡單易操作的灌膠塑料盒灌制黏稠的HAG垂直凝膠，并改進了適合小分子量核酸和蛋白高濃度瓊脂糖電泳（HAGE）的緩沖液條件，可有效分離在10-100 bp范圍內相差2-bp或2-nt的DNA片段，在10-200 kDa范圍內實現植物復雜蛋白質的高分辨率分離。HAGE不僅達到了媲美PAGE的小分子量核酸蛋白分離效果，而且制備過程中也不涉及危險化學試劑；更為關鍵的是HAGE可以應用于一些PAGE較難應用的研究，如In-Gel Western blot和蛋白凝膠回收。該方法的建立為植物蛋白質分離鑒定等研究提供了技術支撐。
該研究成果以“A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins”為題發表于《International Journal of Biological Macromolecules》。中國熱科院生物所副研究員常麗麗為論文第一作者，中國熱科院生物所副研究員仝征、海口實驗站研究員徐兵強為論文通訊作者。該研究得到了國家重點研發計劃、海南省自然科學基金、中國熱帶農業科學院基本科研業務費等項目資助。
該團隊自組建以來，已構建穩定的熱帶作物蛋白質組學技術體系，并利用比較蛋白質組學、磷酸化蛋白質組學、高通量蛋白質組學等技術重點圍繞天然橡膠生物合成、木薯塊根淀粉積累、香蕉枯萎病致病機理等開展研究，獲得較好的研究進展，已發表學術論文49篇，其中在《Molecular & Cellular Proteomics》《Journal of Proteome Research》等期刊發表SCI論文30篇；獲授權國家發明專利6件，海南省科技進步二等獎1項。
論文鏈接（點擊閱讀原文查看）：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358
日期：2023-02-15
核酸和蛋白質的凝膠分離一直是分子生物學研究的重要組成，但低/中濃度瓊脂糖凝膠電泳對于低分子量核酸和蛋白質的分離達不到聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）的高分辨率。針對這一難題，本研究團隊利用高溫高壓制備了充分溶解的高濃度瓊脂糖凝膠（HAG），發明了一種簡單易操作的灌膠塑料盒灌制黏稠的HAG垂直凝膠，并改進了適合小分子量核酸和蛋白高濃度瓊脂糖電泳（HAGE）的緩沖液條件，可有效分離在10-100 bp范圍內相差2-bp或2-nt的DNA片段，在10-200 kDa范圍內實現植物復雜蛋白質的高分辨率分離。HAGE不僅達到了媲美PAGE的小分子量核酸蛋白分離效果，而且制備過程中也不涉及危險化學試劑；更為關鍵的是HAGE可以應用于一些PAGE較難應用的研究，如In-Gel Western blot和蛋白凝膠回收。該方法的建立為植物蛋白質分離鑒定等研究提供了技術支撐。
該研究成果以“A method for high-concentration agarose gel preparation and its application in high-resolution separation of low-molecular-weight nucleic acids and proteins”為題發表于《International Journal of Biological Macromolecules》。中國熱科院生物所副研究員常麗麗為論文第一作者，中國熱科院生物所副研究員仝征、海口實驗站研究員徐兵強為論文通訊作者。該研究得到了國家重點研發計劃、海南省自然科學基金、中國熱帶農業科學院基本科研業務費等項目資助。
該團隊自組建以來，已構建穩定的熱帶作物蛋白質組學技術體系，并利用比較蛋白質組學、磷酸化蛋白質組學、高通量蛋白質組學等技術重點圍繞天然橡膠生物合成、木薯塊根淀粉積累、香蕉枯萎病致病機理等開展研究，獲得較好的研究進展，已發表學術論文49篇，其中在《Molecular & Cellular Proteomics》《Journal of Proteome Research》等期刊發表SCI論文30篇；獲授權國家發明專利6件，海南省科技進步二等獎1項。
論文鏈接（點擊閱讀原文查看）：https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2023.123358
日期：2023-02-15
