二維聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)結(jié)合了等電聚焦技術(shù)（根據(jù)蛋白質(zhì)等電點(diǎn)進(jìn)行分離）以及SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)（根據(jù)蛋白質(zhì)的大小進(jìn)行分離）.這兩項(xiàng)技術(shù)結(jié)合形成的二維電泳是分離分析 蛋白質(zhì)最有效的一種電泳手段. 通常第一維電泳是等電聚焦,在細(xì)管中（φ1～3 mm）中加入含有兩性電解質(zhì)、8M的脲以及非離子型去污劑的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行等電聚焦,變性的蛋白質(zhì)根據(jù)其等電點(diǎn)的不同進(jìn)行分離.而后將凝膠從管中取出,用含有SDS的緩沖液處理30 min,使SDS與蛋白質(zhì)充分結(jié)合.
將處理過的凝膠條放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠上,加入丙烯酰胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定并與濃縮膠連接.在第二維電泳過程中,結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)從等電聚焦凝膠中進(jìn)入SDS－聚丙烯酰胺凝膠,在濃縮膠中被濃縮,在分離膠中依據(jù)其分子量大小被分離.
這樣各個(gè)蛋白質(zhì)根據(jù)等電點(diǎn)和分子量的不同而被分離、分布在二維圖譜上.細(xì)胞提取液的二維電泳可以分辨出1000～2000個(gè)蛋白質(zhì),有些報(bào)道可以分辨出5000～10000個(gè)斑點(diǎn),這與細(xì)胞中可能存在的蛋白質(zhì)數(shù)量接近.由于二維電泳具有很高的分辨率,它可以直接從細(xì)胞提取液中檢測(cè)某個(gè)蛋白.
將處理過的凝膠條放在SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳濃縮膠上,加入丙烯酰胺溶液或熔化的瓊脂糖溶液使其固定并與濃縮膠連接.在第二維電泳過程中,結(jié)合SDS的蛋白質(zhì)從等電聚焦凝膠中進(jìn)入SDS－聚丙烯酰胺凝膠,在濃縮膠中被濃縮,在分離膠中依據(jù)其分子量大小被分離.
這樣各個(gè)蛋白質(zhì)根據(jù)等電點(diǎn)和分子量的不同而被分離、分布在二維圖譜上.細(xì)胞提取液的二維電泳可以分辨出1000～2000個(gè)蛋白質(zhì),有些報(bào)道可以分辨出5000～10000個(gè)斑點(diǎn),這與細(xì)胞中可能存在的蛋白質(zhì)數(shù)量接近.由于二維電泳具有很高的分辨率,它可以直接從細(xì)胞提取液中檢測(cè)某個(gè)蛋白.
