平酸菌及其檢驗

   2010-05-11 682
核心提示:一、平酸菌簡介  引起罐頭食品酸敗變質而又不胖聽(即產酸不產氣)的微生物在罐頭工業上稱為平酸菌。它是需氧芽胞桿菌科中的一
 一、平酸菌簡介

  引起罐頭食品酸敗變質而又不胖聽(即產酸不產氣)的微生物在罐頭工業上稱為平酸菌。它是需氧芽胞桿菌科中的一群高溫型,具有嗜熱、耐熱的特點,其適宜生長溫度為4560℃,最適生長溫度為5055℃,在37℃生長緩慢,多數菌種在pH6.8-7.2生長良好,少數菌種能在pH5.0生長,廣泛分布于土壤,灰塵和各種變質食品中。造成罐頭食品平蓋酸敗的細菌,從微生物學分類來分,主要有二種:通常是嗜熱脂肪芽胞桿菌,凝結芽胞桿菌。

  嗜熱脂肪牙胞桿菌:(Bacillus stearothermo philus)

  革蘭氏陽性菌,能運動,周生鞭毛。芽胞橢圓形,亞端生或端生,通常使孢囊膨大,最高生長溫度6575℃。能夠葡萄糖產酸,水解淀粉。

  凝結芽胞桿菌:(Bacillus Coagulans)

  革蘭氏陽性,能運動,周生鞭毛。芽胞椰圓形或柱狀,一次端生或端生,偶爾中生,有些菌株孢囊膨大不明顯,有些菌株的孢囊大。最高生長溫度5560℃,最低生長溫度15-25℃。接觸酶陽性,葡萄糖產酸。

二、罐頭食品中平酸菌的檢驗方法

  1.試樣制備:

  罐頭樣品預先經55℃保溫一周,然后按正常方法進行開罐,吸取內容物液體1毫升,如為固體內容物則取1克,以無菌手續接種于3#培養基中,每罐接種2支。

  2.增菌培養

  接種試樣的3#培養基試管,于55℃培養48小時,如發現指示劑由紫變黃即判斷為陽性,同時進行涂片鏡檢為芽胞桿菌(有時不易檢到芽胞),如陽性需繼續培養48小時。

  3.純分離培養

  將陽性培養基試管劃線接種于3#培養基瓊脂平板55℃培養48小時,檢查有無可疑菌落(菌落黃色,周圍有黃色環,中心色深不透明),如有可疑菌落則接種于普通瓊脂斜面和芽胞培養基斜面,55℃培養24小時,涂片鏡檢觀察有無芽胞,以及芽胞的形狀及位置,并同時以普通瓊脂斜面培養物進行生化學試驗。

  4.鑒別:

  菌體形態:為革蘭氏陽性芽胞桿菌。

  生化反應:取上項斜面培養物按下列項目進行鑒別。

 

  平酸菌生化反應鑒別表

 

項目

菌別

60

培養

酸鹽

葡萄

基質

VP

反應

7NaCL

肉湯

檸檬

酸鹽

酸性

胰胨

嗜熱脂肪芽胞桿菌

 

生長

 

d +

 

+

 

 

 

 

 

不生長

凝結芽胞桿菌

 

不定

 

d-

 

 

 

+

 

 

b

 

生長

 

注:+為產酸或陽性,-為陰性
d+:50-85%的陽性
d-:15--49%的陽性
b:25-49%陽性

45-55℃培養三天后無反應報告為陰性

5.培養基的配方

  ①3#葡萄糖肉湯培養:
   蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
   酵母浸膏 1克 牛肉膏 5克
   可溶性淀粉 1克 黃豆浸出液 50mL
   水1000mL 0.4%溴甲酚紫 4mL
   pH 7.0-7.2
   115℃高壓滅菌15min

  ②3#培養基瓊脂:

  3#葡萄糖肉湯 1000mL
  瓊脂 18-20克
  pH 7.2-7.4   121℃高壓滅菌15min

  ③酸性胰胨瓊脂

  胰蛋白胨 5克 酵母膏 5克
  葡萄糖 5克 K2HPO4 4克
  水1000mL 瓊脂 18-22克(15-20g)
  瓊脂粉 12克
  pH5.0  121℃高壓滅菌15 min

  ④7%NaCL肉湯

  蛋白胨 5克 牛肉膏 3克
  NaCL 70克 水 1000mL
  pH7.0 121℃高壓滅菌15min

  ⑤芽胞培養基

  牛肉膏 10克 蛋白胨 10克
  NaCL 5克 K2HPO4 3克
  (K2HPO4 3H2O 3.9克)
  MnSO4 0.03克 瓊脂 25克
  pH 7.2 121℃高壓滅菌15min

  ⑥V-P培養基

  蛋白胨 5克 葡萄糖 5克
  K2HPO4 5克 蒸餾水 1000mL
  pH7.2 121℃高壓滅菌15min

  ⑦西蒙氏枸櫞酸鹽瓊脂(檸檬酸鹽)

  NaCL 5克 硫酸鎂 0.2克
  磷酸銨(NH4H2PO4)1克 磷酸氫二鉀K2HPO4)1克
  枸櫞酸鈉 5克
  瓊脂 20克 蒸餾水 1000mL
  0.2%溴麝香草酚蘭酒精溶液 40mL
  pH 6.8 121℃高壓滅菌15min

  ⑧童漢氏蛋白胨水

  蛋白胨 10克 NaCL 5克
  蒸餾水 1000mL pH 7.4
  121℃高壓滅菌15min

  ⑨硝酸鹽肉湯

  牛肉膏 3克 蛋白胨 5克
  硝酸鉀 1克 蒸餾水 1000mL
  pH 7.0 121℃高壓滅菌20min(15min)





 
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